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Beschreibung
Mindmap von Yurany Carreño, aktualisiert more than 1 year ago
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Erstellt von Yurany Carreño
vor etwa 6 Jahre
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secuenciacion de acidos nucleicos
- Básicamente Involucra
- 1. La degradación
específica y el
fraccionamiento de los
polinucleótidos a
fragmentos pequeños
- 2. La secuenciación
de los fragmentos
pequeños
- 3. El uso de un
procedimiento de
degradación que
produce una serie de
fragmentos de
polinucleótidos que
traslapan el punto
de corte en la serie
- 1. La degradación
específica y el
fraccionamiento de los
polinucleótidos a
fragmentos pequeños
- Historia
- Inicialmente se secuenció usando método
similares a los usados para secuenciar proteínas
- F. Sanger et al.
desarrollaron
técnicas de
fraccionamiento
más rápidas y
simples para
secuenciación de
ARN y ADN.
- Más adelante
desarrollaron un
método más
eficiente: el
enzimático
- Más adelante
desarrollaron un
método más
eficiente: el
enzimático
- Luego de 1975 hubo
avances
significativos
- -Descubrimiento de
enzimas que cortan el
ADN en secuencias
específicas. -Técnicas de
clonación para
secuenciar segmentos
de ADN
- -Descubrimiento de
enzimas que cortan el
ADN en secuencias
específicas. -Técnicas de
clonación para
secuenciar segmentos
de ADN
- Inicialmente se secuenció usando método
similares a los usados para secuenciar proteínas
- Métodos
- Degradación química
(Maxam & Gilbert, 1977).
Puede determinar la
secuencia desde la primera
base. Es el más adecuado
para determinar la
secuencia de fragmentos
cortos.
- Los fragmento de ADN separados se unen
por electroforesis. Las reacciones químicas
en este proceso son las siguientes: 1) Corte
de purinas. 2) Corte de adeninas. 3) Corte de
pirimidinas. 4) Corte de citosina.
- Los fragmento de ADN separados se unen
por electroforesis. Las reacciones químicas
en este proceso son las siguientes: 1) Corte
de purinas. 2) Corte de adeninas. 3) Corte de
pirimidinas. 4) Corte de citosina.
- Método enzimático (Sanger et
al., 1977). Consiste en la
utilización de la molécula ADN
polimerasa para sintetizar
cadenas de ADN con
terminación específica.
- Se llevan a cabo cuatro reacciones con
ddNTPs diferentes para que se
sinteticen distintos fragmentos que
puedan ser separados con
electroforesis y poder determinar la
secuencia del tempaldo.
- Se llevan a cabo cuatro reacciones con
ddNTPs diferentes para que se
sinteticen distintos fragmentos que
puedan ser separados con
electroforesis y poder determinar la
secuencia del tempaldo.
- Degradación química
(Maxam & Gilbert, 1977).
Puede determinar la
secuencia desde la primera
base. Es el más adecuado
para determinar la
secuencia de fragmentos
cortos.
- Secuenciación
contemporánea
- Reacción en cadena de
la polimerasa (PCR):
- Permite la amplificación
exponencial del ADN, produciendo
millones de copias de un
fragmento. Se genera gracias a la
acción de los oligonucleótidos ya
que contienen un extremo 3`libre
que es complementario con la
cadena molde del ADN.
- Este proceso consta de tres pasos: 1)
Desnaturalización de las hebras de
ADN. 2) Temperatura de
alineamiento. 3) Extensión de la
cadena de ADN.
- Permite la amplificación
exponencial del ADN, produciendo
millones de copias de un
fragmento. Se genera gracias a la
acción de los oligonucleótidos ya
que contienen un extremo 3`libre
que es complementario con la
cadena molde del ADN.
- Polimerasa Taq:
- Permitió automatizar la reacción
de PCR, sin tener que adicionar
enzimas nuevas en cada reacción,
debido a que resiste altas
temperaturas
- Fue aislada de la bacteria
Thermus aquaticus
- Permitió automatizar la reacción
de PCR, sin tener que adicionar
enzimas nuevas en cada reacción,
debido a que resiste altas
temperaturas
- Marcaje del ADN:
- Se realiza mediante la utilización de fluoróforos, debido
a que el trabajo con isótopos radioactivos utilizados
anteriormente, es demorado, costoso y peligroso
- Adicionalmente las
moléculas
fluorescentes
contribuyen a la
automatización de la
secuenciación de los
ácidos nucleicos.
- Se realiza mediante la utilización de fluoróforos, debido
a que el trabajo con isótopos radioactivos utilizados
anteriormente, es demorado, costoso y peligroso
- Reacción en cadena de
la polimerasa (PCR):
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