Validación de técnicas para detección de sangre, sangre humana y grupo sanguíneo ABO

MATERIAL Y MÉTODO
1. Muestras, soportes y condiciones
  1. Se tomó muestra de sangre por punción venosa en tubo con anticoagulante EDTA
  2. Se realizaron manchas sobre varios tipos de tela
  3. Se expuso a una temperatura de -20°, 4°, 37° y 60° C por periodos de tiempo de 24 horas, una semana y un mes
2. Test de Piramidón, Fenolftaleina, Luminol
  1. Pretratamiento de las muestras
    1. En tubos colocar un fragmento de la mancha y agregar 1 ml de solución salina al 0.85%
    2. Dejar reposar el tiempo necesario para separar la mancha del soporte.
  2. Test de Piramidón
    1. A 3 gotas de muestra se le agregan 3 gotas de los reactivos de Piramidón
      1. (+) =coloración violeta, (-) = sin cambio de color
    2. reactivos de Piramidón
      1. ácido acético y perhidrol
  3. Interferencia de sustancias similares a la sangre
    1. Se hicieron manchas sobre tela de algodón de: frutas, verduras y otras sustancias como vino tinto, salsa de tomate, cafe y fluidos biológicos.
3. Test de Takayama
  1. Muestras, soportes y condiciones
    1. Con muestra de sangre se realizaron manchas sobre diferentes tipos de tela.
    2. La muestra se expuso a diferentes temperaturas en diferentes periodos de tiempo. En ambientes cerrados, abiertos y en un recipiente con tierra negra
  2. Sensibilidad de la prueba
    1. diluciones seriadas a partir de 1/10, así: 1/100, 1/500, 1/1.000, 1/ 5.000, 1/10.000.
  3. Test de Takayama
    1. Se hace un raspado de la mancha para obtener escamas, estas se colocan entre lámina y laminilla.
    2. Se agrega por capilaridad una gota del reactivo de Takayama dejando en reposo de 10 a 20 minutos. .
    3. Se observó al microscopio con objetivo de 10X y 40X incluyendo controles positivos y negativos
4. Determinación de sangre humana en manchas.
  1. Prueba de Inhibición de la aglutinación
5. Absorción - Elución
INTRODUCCIÓN
1. ESTUDIOS QUE SE PUEDEN REALIZAR
  1. identificación de sangre proveniente de un ser humano
  2. grupo sanguíneo al que pertenece
  3. análisis de ADN
2. EVALUACIÓN DE LOS ESTUDIOS QUE SE REALIZAN
  1. se sometieron muestras conocidas a diferentes condiciones de
    1. temperatura
    2. clase de soporte
    3. dilución
    4. ambiente
    5. tiempo de exposición
DISCUSIÓN
1. El test de Piramidón demostró ser una excelente prueba presuntiva en diferentes soportes y condiciones
2. Cuando se compara la sensibilidad de los 3 test presuntivos se observa que el más sensible es el Luminol (Hasta 1/500.000) seguido de Fenolftaleina (Hasta 1/5.000).
3. El test de Takayama se ve afectado cuando la muestra ha sido expuesta a temperaturas altas sin importar el tiempo de exposición
CONCLUSIONES
1. Pruebas confirmatorias no se ven afectadas por condiciones de exposición de muestras o el soporte pero su sensibilidad es baja
2. El Luminol se constituye como la prueba más apropiada en el estudio de posibles manchas de sangre sobre los test de Piramidón y Fenolftaleina

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