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Created by annjulie paz
over 6 years ago
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Inhibición in vitro de las enzimas alfa-amilasa y lipasa pancreática
por fracciones fenólicas de extractos etanólicos de hojas de Yacón
objetivo de la investigación:
Fue determinar el efecto
inhibidor in vitro de las enzimas alfa-amilasa pancreática y
lipasa pancreática, por fracciones fenólicas de extractos
etanólicos de hojas de yacón cultivadas en dos municipalidades
colombianas: Chía, en el departamento de Cundinamarca,
y San Francisco, en el departamento de Antioquía.
Introducción:
Uno de los problemas prevalentes en la salud de la población es la obesidad, es por ello que la prevención y el
tratamiento de la obesidad son prioridades importantes para
los sistemas de salud lo cual es necesario desarrollar otras modalidades de tratamiento que
produzcan mejores resultados; los suplementos producidos a partir de extractos de plantas y
terapias a base de dietas, son algunas de las estrategias más
comunes para bajar de peso en medicina complementaria y
alternativa.
Extractos etanólicos de hojas de yacón:
La obtención de los extractos se realizó mediante
percolación, a partir de 5 Kg de las hojas previamente
maceradas y pulverizadas, usando como solvente etanol
del 70 % (v/v) .El producto obtenido se filtró y envasó en
frascos de vidrio de color ámbar. Parte de este extracto fue
concentrado a presión de 50 mbar y temperatura de 50 °C
en un rota-evaporador Laborata 4000 (Heidolph), luego fue
almacenado a 4 °C.
Actividad inhibitoria alfa-amilasa
La reacción se llevó a cabo en placas de
microtitulación de polipropileno de 96 pozos Nunc. Un
volumen de 25 μL de la cada fracción fenólica se mezcló con
25 μL de la solución de la enzima alfa-amilasa pancreática
,previamente disuelta en tampón salino fosfato 0,1 M (pH 6,9) hasta una concentración de 0,5
mg/mL. La mezcla se incubó a 25 °C por 10 min, luego se
adicionó 25 μL de una solución de almidón (0,5 % p/v)
disuelto en tampón salino fosfato 0,1 M y se incubó a 25°C
por 10 min. A la reacción se le adicionó 50 μL del cromógeno
DNS (ácido dinitrosalicílico), a una concentración de 96 mM, seguido de incubación en agua
hirviente por 5 min y enfriamiento a temperatura ambiente.
La absorbancia de la muestra (AM) se leyó a la longitud de
onda de 540 nm en el lector de placas . El porcentaje de inhibición (% I) se calculó
mediante la ecuación:
% I = (1-AM/AC) x 100
Actividad inhibitoria lipasa pancreática:
La inhibición de la enzima se realizó mediante método
espectrofotométrico. La reacción se llevó a cabo en placas de
microtitulación de polipropileno de 96 pozos Nunc. cada fracción fenólica se incubó con
150 μL del sustrato, compuesto por una mezcla de p-nitrofenilpalmitato
(p-NPP) 0,2 mM, ácido deoxi-taurocolico 5 mM disuelto en tampón fosfato monobásico 50 mM (pH8,0).
Después de la pre-incubación se adicionó 25 µL de la enzima
lipasa pancreática previamente
disuelta en buffer de reacción a la concentración de 10
mg/mL. Después de incubación a 37 °C por 5 min, se midió
la absorbancia de cada mezcla de reacción a la longitud de
onda de 410 nm en un lector de placas. Como control positivo del ensayo se usó tetrahidrolipistatina.
Hoja de yacon
Conclusiones:
El lainvestigacion realizada muestra que las hojas de yacón cultivadas
en los municipios de Chía y San Francisco (Colombia),
presentan ácidos fenólicos y flavonoides que podrían inhibir
la actividad catalítica de enzimas digestiva como la alfaamilasa
y lipasa pancreática, respectivamente.
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