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Description
Mind Map by DIANA MINERVA CASTANEDA , updated more than 1 year ago
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Created by DIANA MINERVA CASTANEDA
over 6 years ago
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Detección de Vibrio cholerae
- Bacterias gram negativas, se
desarrollan en presencia
elevada de sales biliares
- El aislamiento es facilitado
por medios de pH alcalino
(agua de peptona alcalina APW)
- Medio TCBS
- Comúnmente
utilizado para la
detección de V.
cholerae y V.
parahaemolyticus
- Inhibe a la mayoría
de los no vibrios
- Procedimiento
- A. Enriquecimiento y recubriemiento
- 1. Pesar 25 g de muestra en un
tarro tarado (capacidad de
aproximadamente 500 ml).
- 1.1. Los productos tales como
mariscos o verduras se pueden
mezclar o cortar en trozos
pequeños con tijeras estériles.
- 2. Añadir 225 ml de
APW al frasco.
Mezclar bien la
muestra o mezclar 2
min a alta velocidad.
- 3. Incubar APW a 35 ±
2 ° C durante 6 a 8 h.
- 3.1. Vuelva a incubar el frasco durante la noche si la
muestra se ha procesado de alguna manera. Para el
análisis de las ostras crudas, se incluye un segundo
matraz tarado con 25 g de producto más 2475 ml de
APW. Este matraz debe incubarse de 18 a 21 h a 42 ±
0,2 ° C en un baño de agua. Una técnica de
enumeración por el número más probable (MPN)
también se puede realizar si se desea.
- 4. Preparar las placas secas de agar
TCBS. También se pueden incluir los
agars modificados de CPC o CC.
- 5. Transferir un bucle de 3 mm de la
película superficial del cultivo de APW a
la superficie de una placa de TCBS
secada (y mCPC o CC) y cortar de manera
que produzca colonias aisladas.
- 6. Incubar TCBS durante la noche
(18 a 24 h) a 35 ° ± 2 ° C. Incubar
mCPC y CC durante la noche a
39-40ºC
- 6.1. Si no se dispone de una incubadora a 39-40 °
C entonces normalmente es adecuado 35-37 ° C
ya que la selectividad se determina
principalmente por los antibióticos en la
formulación que por la alta temperatura.
- Identificación
- Las colonias típicas de V. cholerae en agar
TCBS son grandes (2 a 3 mm), lisas, amarillas y
ligeramente aplanadas con centros opacos y
periferias translúcidas.
- Las colonias típicas de V. cholerae en
agar mCPC o CC son pequeñas, lisas,
opacas y de color verde a púrpura, con
un fondo púrpura en incubación
prolongada
- Las colonias típicas de V. cholerae en agar
TCBS son grandes (2 a 3 mm), lisas, amarillas y
ligeramente aplanadas con centros opacos y
periferias translúcidas.
- 7. Para la identificación bioquímica, las
colonias de placas apiñadas deben ser
estriadas en un agar no selectivo (T1N1, T1N3
o TSA-2% NaCl agar) para la pureza. Incubar
durante la noche a 35 ± 2 ° C y proceder con la
identificación utilizando una única colonia
aislada.
- 7.1. Subcultivo tres o más colonias típicas
de cada medio de galvanoplastia a T1N1
inclinaciones de agar o agarre de
motilidad. Incubar las inclinaciones o
puñaladas durante la noche a 35 ° ± 2 ° C.
- 7.1. Subcultivo tres o más colonias típicas
de cada medio de galvanoplastia a T1N1
inclinaciones de agar o agarre de
motilidad. Incubar las inclinaciones o
puñaladas durante la noche a 35 ° ± 2 ° C.
- 6.1. Si no se dispone de una incubadora a 39-40 °
C entonces normalmente es adecuado 35-37 ° C
ya que la selectividad se determina
principalmente por los antibióticos en la
formulación que por la alta temperatura.
- 6. Incubar TCBS durante la noche
(18 a 24 h) a 35 ° ± 2 ° C. Incubar
mCPC y CC durante la noche a
39-40ºC
- 5. Transferir un bucle de 3 mm de la
película superficial del cultivo de APW a
la superficie de una placa de TCBS
secada (y mCPC o CC) y cortar de manera
que produzca colonias aisladas.
- 3.1. Vuelva a incubar el frasco durante la noche si la
muestra se ha procesado de alguna manera. Para el
análisis de las ostras crudas, se incluye un segundo
matraz tarado con 25 g de producto más 2475 ml de
APW. Este matraz debe incubarse de 18 a 21 h a 42 ±
0,2 ° C en un baño de agua. Una técnica de
enumeración por el número más probable (MPN)
también se puede realizar si se desea.
- 3. Incubar APW a 35 ±
2 ° C durante 6 a 8 h.
- 1.1. Los productos tales como
mariscos o verduras se pueden
mezclar o cortar en trozos
pequeños con tijeras estériles.
- 1. Pesar 25 g de muestra en un
tarro tarado (capacidad de
aproximadamente 500 ml).
- A. Enriquecimiento y recubriemiento
- Comúnmente
utilizado para la
detección de V.
cholerae y V.
parahaemolyticus
- Agar mCPC
- Crecen las cepas de V. cholerae
excepto el biotipo clásico
- Crecen las cepas de V. cholerae
excepto el biotipo clásico
- API 20E
- Para facilitar la identificación
- La Tabla 2 presenta el número mínimo de
caracteres necesarios para identificar las
cepas de V. cholerae. La capacidad de V.
cholerae de crecer en triptona al 1% sin
añadir NaCl lo diferencia de otros vibrios
positivos a la sacarosa.
- La Tabla 2 presenta el número mínimo de
caracteres necesarios para identificar las
cepas de V. cholerae. La capacidad de V.
cholerae de crecer en triptona al 1% sin
añadir NaCl lo diferencia de otros vibrios
positivos a la sacarosa.
- Para facilitar la identificación
- Bibliografía: - Charles A. (2004). V. cholerae. Manual
Analítico Bacteriológico. “Recuperado de
https://www.fda.gov/Food/FoodScienceResearch
/LaboratoryMethods/ucm070830.htm”.
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