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Cultivo Celular
Description
Mind Map on Cultivo Celular, created by AIDA FERNANDA NAVARRO REYNA on 16/07/2021.
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AIDA FERNANDA NAVARRO REYNA
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Cultivo Celular
Inicio
Siembra
Agregar en un tubo cónico de 50mL el Medio RPMI-1640, el Suero Fetal Bovino (SFB), L-glutamina y los antibióticos.
Homogenizar
Filtrar y trasladar 9mL del medio con suplementos en un tubo cónico de 15mL
Agregar 100L de fitohemaglutina
Agregar 1mL de sangre
Homogenizar
Incubar a 37°C por 72 horas
Cosecha
Agregar 100L de colchicina (concentración de colchicina: 10g/mL).
Incubar por 10 minutos a 37°C.
Centrifugar 4000rpm por 8mins. y resuspender en 10mL de KCl 75 micro M
Dejar incubar 20 minutos a 37°C.
Centrifugar 4000rpm por 8mins. y descartar el sobrenadante
Agregar 1mL de FIX a 4°C, gota a gota hasta completar 10mL.
Incubar 30 minutos a temperatura ambiente.
Centrifugar 4000rpm por 8mins. y descartar sobrenadante dejando micro1mL
Agregar 10mL de FIX a 4°C, gota a gota el primer mililitro.
Incubar 5 minutos a temperatura ambiente y centrifugar a 4000rpm por 8mins.
Descartar el sobrenadante y dejar 1mL y resuspender
Rotular con número de mesa y sección, y guardar a -20°C.
FIN
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