Métodos parasitológicos

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Métodos parasitológicos
  1. Flutuação
    1. Método de Faust
      1. Método utilizado para pesquisa de cistos de protoziários e ovos de helmintos; 1- Dissolver cerca de 5g de fezes em 10ml de água e filtrar em gaze dobrada em quatro. 2- Depositar o material em tubo cônico de centrífuga e centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos. 3- Desprezar o sobrenadante e ressuspender novamente em 10 ml de água. 4-Repetir os passos 2 e 3 até que o sobrenadante apresente-se claro. 5-Adicionar 10 ml de sulfato de zinco (ZnSO2) 3 %, homogenizar e centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos. 6-Recolher com alça de platina a película superficial, adicionar uma gota da solução de lugol e observar ao microscópio.
      2. Método de Willis
        1. Método específico para pesquisa de ovos de Ancilostomídeo. 1-A solução saturada de cloreto de sódio é feita adicionando aproximadamente 40g de NaCl a 100mL de água sob aquecimento até saturação. 2- Colocar uma quantidade de fezes em uma cuba contendo a solução saturada de cloreto de sódio, dissolver as fezes nesta solução e acrescentar água até a borda. 3- Colocar sob a borda da cuba uma lâmina de vidro quase tocando a solução saturada e deixar de 30 a 45 minutos . 4- Após este tempo, inverter a lâmina rapidamente e observar ao microscópio.
      3. Sedimentação
        1. Método de HOFFMAN, PONS & JANER
          1. Para pesquisa de cistos de protozoários e ovos de helmintos. 1- Dissolver cerca de 4g de fezes em 10 ml de H2O em frasco pequeno 2- Filtrar em gaze dobrada em quatro, utilizando um cálice de sedimentação 3- Completar o cálice com água e homogeneizar com bastão de vidro. 4- Deixar em repouso de 2 a 24 horas. 5- Com uma pipeta de pasteur, retirar uma amostra do fundo do vértice do cálice. 6- Examinar ao microscópio, adicionando uma gota da solução de lugol.
          2. Método de Ritchie
            1. Utilizado na pesquisa de cistos de protozoários. 1- Idêntico ao método de FAUST até o ítem 4. 2- Adicionar cerca de 8 ml de formol a 10%, homogenizar, descansar por 10’ a 20’. 3- Adicionar cerca de 2 ml de éter, agitar vigorosamente e centrifugar a 1500 rpm por 2 minutos.
          3. Métodos quantitativos
            1. Método de Kato Katz
              1. Utilizado principalmente na pesquisa de ovos de S. mansoni e outros helmintos.1- Depositar uma pequena quantidade de fezes sobre uma folha de papel higiênico colocando a tela por cima e pressionando com a paleta. 2. Colocar sobre uma lâmina de vidro a placa de plástico e depositar no centro do orifício as fezes que ultrapassaram as malhas da tela (40 - 60 mg). 3. Comprimir as fezes no orifício da placa até completá-lo. 4. Sobrepor a lamínula de celofane e inverter a preparação realizando pressão com o polegar sobre a lâmina até obter uma uniformidade do material. 5. Deixar em repouso por cerca de 60 minutos a temperatura ambiente. 6. Contar todos os ovos encontrados e multiplicar o total por 24, resultando em ovos/grama de fezes.
              2. Método de Stoll e Housher
                1. Utiliza-se a solução de NaOH 0,1N que saponifica as gorduras das fezes e mantendo a suspensão clara. A estimativa de ovos por grama varia, utilizando o FC conforme natureza das fezes
              3. Métodos diretos
                1. Exame direto a fresco
                  1. Utilizado para pesquisa trofozoítos e protozoários. 1- uma gota de sangue colhido com anticoagulante. 2- colocado entre lamina e lamínula. 3- levada ao microscópio.
                  2. Método de Stront
                    1. Utilizado para pesquisa de trofozoítos e protozoários. 1- Sangue coletado em tubo capilar. 2- centrifuga-se. 3- examinar na lamina o material de interface entre hemaceas e leucócitos.
                    2. Preparação corada
                      1. 1- Esfregaço e gota devem ser corados com método de Giemsa ou Leishman. Permite a detecção e diferenciação de tripomastigotas de T. cruzi e T. rangeli.
                    3. Método de Graham
                      1. Utilizado para pesquisa de ovos de E. vermicularis. 1- Fita adesiva transparente em uma espátula, com a parte adesiva para fora. 2- pressiona-se a espátula contra as pregas anais. 3- coleta-se a fita e no momento do exame pinga-se uma gota de xileno e a pressiona contra lâmina. Leva-se ao microscópio.
                      2. Método de isolamento de larvas
                        1. Método de Baermann e moraes
                          1. 1-Colocar a água aquecida no funil com o tubo de látex vedado pela pinça de Mohr, quantidade suficiente para tocar a extremidade inferior da peneira contendo as fezes. 2-Depositar pequena quantidade de fezes sobre a peneira contendo gaze e deixar em repouso por 45 a 60 minutos. 3-Após este tempo, soltar a pinça de Mohr e deixar que o material escorra para um tubo de hemólise. 4-Centrifugar o material em baixa rotação e observar o sedimento em objetiva de 10x. Este método é específico para a pesquisa de larvas de S. stercoralis.
                          2. Método de RUGAI, MATTOS & BRISOLA
                            1. 1- Estender, sobre a abertura de um recipiente contendo fezes, gaze dobrada quatro vezes; 2- Encher com água aquecida a 40-45°C, um copo cônico de sedimentação; 3- Transferir o recipiente com as fezes para o interior do copo cônico de sedimentação; 4- Deixar em repouso durante 60 minutos. 5. Colher o sedimento, no fundo do copo cônico, com pipeta capilar longa. Alguns autores recomendam retirar o recipiente do copo Cônico antes da colheita do sedimento. Entretanto, outros preferem manter o recipiente, para evitar o revolvimento do líquido;
                          3. Ziehl Nelsen Modificado
                            1. Para pesquisa de oocistos, onde é realizado um esfregaço, este é corado com caribol- fuccina, lavado com etanol até interromper cor. É feita a lavagem e adicionado azul de metileno. Lava-se novamente e observa na objetiva de 100x.
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