FUNDAMENTOS DE EVOLUCIÓN MOLECULAR DIRIGIDA DE ENZIMAS.

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biologia sintetica

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FUNDAMENTOS DE EVOLUCIÓN MOLECULAR DIRIGIDA DE ENZIMAS.
  1. se sustenta
    1. en el denominado diseño “racional” (mutagénesis dirigida a posiciones concretas del catalizador, en base a modelos o estructuras cristalográficas)
      1. estrategia alternativa más adecuada
        1. denominada evolución molecular dirigida o evolución in vitro
          1. comprime la escala temporal de la evolución
            1. GENERACIÓN DE DIVERSIDAD
              1. eleccion de un organismo hospedador
                1. considerando la eficiencia de transformación, la estabilidad del DNA plasmídico y la tasa de crecimiento.
                2. detección de las propiedades deseadas
                  1. selección biológica
                    1. La enzima se encuentra vinculada a la supervivencia del hospedador (dificilmente la enzima se sedesacopla de su funcion)
                    2. el metodo de SCREENING
                      1. método más versátil y flexible, donde cada uno de los miembros de la librería es analizado individualmente para la propiedad catalítica a estudiar
                      2. estudios “SEMI-RACIONALES"
                        1. método que se sitúa entre el diseño “racional” y el evolutivo. Esto se debe a que hacen uso del análisis estructural de la enzima para la elección de los residuos a estudiar sometiéndolos a mutagénesis saturada combinatorial y acoplando el estudio a ensayos en HTP- screening.
                      3. se suelen emplear dos alternativas para la generación de diversidad: la mutagénesis aleatoria a partir de un único gen Métodos in vitro parental, y los métodos de recombinación de DNA de varios
                        1. Método in vitro
                          1. Se basa en la fragmentación aleatoria del ADN mediante la acción de una ADNsa, seguida de una reacción de PCR en ausencia de oligonucleótidos cebadores para el reensamblaje de los fragmentos, la cual gradualmente produce secuencias recombinadas completas con nuevas combinaciones.
                          2. Método in vivo
                            1. método sencillo, rápido y no mutagénico. En efecto, la elevada frecuencia de recombinación y la fácil manipulación de S. cerevisiae
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