19875919
Description
Mind Map by Genómica Grupo A, updated more than 1 year ago
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Created by Genómica Grupo A
over 4 years ago
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FUNDAMENTOS DE EVOLUCIÓN
MOLECULAR DIRIGIDA DE ENZIMAS.
- se sustenta
- en el denominado diseño “racional”
(mutagénesis dirigida a posiciones concretas del
catalizador, en base a modelos o estructuras
cristalográficas)
- estrategia alternativa más adecuada
- denominada evolución molecular
dirigida o evolución in vitro
- comprime la escala temporal de la evolución
- GENERACIÓN DE DIVERSIDAD
- eleccion de un organismo
hospedador
- considerando la eficiencia de transformación, la
estabilidad del DNA plasmídico y la tasa de crecimiento.
- considerando la eficiencia de transformación, la
estabilidad del DNA plasmídico y la tasa de crecimiento.
- detección de las propiedades
deseadas
- selección biológica
- La enzima se encuentra vinculada a la
supervivencia del hospedador (dificilmente
la enzima se sedesacopla de su funcion)
- La enzima se encuentra vinculada a la
supervivencia del hospedador (dificilmente
la enzima se sedesacopla de su funcion)
- el metodo de SCREENING
- método más versátil y flexible, donde cada uno de los
miembros de la librería es analizado individualmente
para la propiedad catalítica a estudiar
- método más versátil y flexible, donde cada uno de los
miembros de la librería es analizado individualmente
para la propiedad catalítica a estudiar
- estudios “SEMI-RACIONALES"
- método que se sitúa entre el diseño “racional” y el evolutivo. Esto se debe a que hacen uso del
análisis estructural de la enzima para la elección de los residuos a estudiar sometiéndolos a
mutagénesis saturada combinatorial y acoplando el estudio a ensayos en HTP- screening.
- método que se sitúa entre el diseño “racional” y el evolutivo. Esto se debe a que hacen uso del
análisis estructural de la enzima para la elección de los residuos a estudiar sometiéndolos a
mutagénesis saturada combinatorial y acoplando el estudio a ensayos en HTP- screening.
- selección biológica
- se suelen emplear dos alternativas para la generación de diversidad: la
mutagénesis aleatoria a partir de un único gen Métodos in vitro parental, y los
métodos de recombinación de DNA de varios
- Método in vitro
- Se basa en la fragmentación aleatoria del ADN mediante la acción de una ADNsa,
seguida de una reacción de PCR en ausencia de oligonucleótidos cebadores para el
reensamblaje de los fragmentos, la cual gradualmente produce secuencias
recombinadas completas con nuevas combinaciones.
- Se basa en la fragmentación aleatoria del ADN mediante la acción de una ADNsa,
seguida de una reacción de PCR en ausencia de oligonucleótidos cebadores para el
reensamblaje de los fragmentos, la cual gradualmente produce secuencias
recombinadas completas con nuevas combinaciones.
- Método in vivo
- método sencillo, rápido y no mutagénico. En efecto, la elevada frecuencia de
recombinación y la fácil manipulación de S. cerevisiae
- método sencillo, rápido y no mutagénico. En efecto, la elevada frecuencia de
recombinación y la fácil manipulación de S. cerevisiae
- Método in vitro
- eleccion de un organismo
hospedador
- comprime la escala temporal de la evolución
- denominada evolución molecular
dirigida o evolución in vitro
- estrategia alternativa más adecuada
- en el denominado diseño “racional”
(mutagénesis dirigida a posiciones concretas del
catalizador, en base a modelos o estructuras
cristalográficas)
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