PRACTICA No. 6 – AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS

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practica 6

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PRACTICA No. 6 – AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS
1 1. Ensayo de Biuret
1.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Adicione gota a gota solución de sulfato de cobre al 0,5%, agite y espere la formación de un color violeta (en este caso el ensayo es positivo). 3. Registre los resultados encontrados.
1.2 2. Reacción Xantoprotéica
1.2.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Añada 0,5mL de ácido nítrico concentrado 3. Caliente los tubos en baño de maría. 4. Deje enfriar y agregue cuidadosamente solución de hidróxido de sodio al 10% en exceso. 5. Un precipitado blanco inicialmente formado, se vuelve luego amarillo y posteriormente se disuelve dando a la solución un color amarillo intenso casi anaranjado. Este resultado se da si en la proteína se encuentran los aminoácidos: fenilalanina, tirosina, tiroxina y triptófano. 6. Registre sus resultados.
1.2.2 3. Ensayo de Millón
1.2.2.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Añada cuatro gotas del reactivo de Millón (solución de nitrato de mercurio (II), nitrato de mercurio (I) y ácido nítrico) 3. Caliente hasta ebullición; si no aparece color adicione tres gotas más y caliente. 4. Si se produce un precipitado rojo la solución problema contiene los aminoácidos: tirosina o tiroxina, de lo contrario no. 5. Registre sus resultados.
1.2.2.2 4. Ensayo de Hopkin’s – Cole
1.2.2.2.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Agregue 2mL de ácido glioxílico, mezcle muy bien. Incline el tubo y sin agitar adicione lentamente por las paredes 1mL de ácido sulfúrico concentrado de modo que se formen dos fases. 3. Espere la formación de un anillo violeta en la interfase si la proteína contiene el aminoácido: triptófano. 4. Registre los resultados.
1.2.2.2.2 5. Ensayo de Sakaguchi
1.2.2.2.2.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Adicione 0,5mL de solución de hidróxido de sodio al 5%, dos gotas de α–naftol en etanol y dos gotas de solución de hipoclorito de sodio al 10%. 3. Agite; la aparición de un color rojo intenso indica que la proteína posee el aminoácido: arginina. 4. Registre los resultados.
1.2.2.2.2.2 6. Ensayo para detectar azufre
1.2.2.2.2.2.1 1. Tome un tubo de ensayo limpio y seco por cada sustancia a analizar, adicione 0,5mL o 0,25g de la sustancia (en caso de ser sólida agregue 1mL de agua). 2. Añada 1mL de solución acuosa de nitrato de plomo al 10 % 3. Si la proteína contiene azufre aparecerá un precipitado negro de sulfuro de plomo
1.2.2.2.2.2.2 7. Determinación cuantitativa de grupos carboxilos en una proteína (Titulación de Sorensen
1.2.2.2.2.2.2.1 1. En un vaso de precipitados de 50mL, pese exactamente 10g ó 10mL de una de las proteínas que usted haya llevado o esté disponible en el laboratorio. 2. Disuelva en agua hasta formar una solución de 100mL en un balón aforado5. 3. Con una pipeta aforada mida 10mL de la solución anterior y transfiérala a un erlenmeyer de 250mL y añada con una pipeta graduada 5mL formol previamente neutralizado6. 4. Espere un momento y añada dos gotas de fenolftaleína. 5. Titule con hidróxido de sodio 0,1N hasta la aparición de un color rosado tenue permanente. 6. Calcule el número de miliequivalente de hidróxido de sodio usados en la titulación y determine el número de equivalentes de grupo – COOH presentes en la proteína.
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