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Inmunoensayo de ligandos

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inmuno
Sandra Naschelly
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Sandra Naschelly
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Inmunoensayo de ligandos
  1. Radio inmunoensayo
    1. Técnica muy sensible. Competencia de unión al Anticuerpo específico entre la sustancia a cuantificar y las cantidades conocidas de la sustancia marcada.
      1. RIA
        1. Se realiza una mezcla con el anticuerpo, Antígeno frío y Antígeno caliente.
          1. Los Antígenos competirán en igualdad de condiciones para unirse con el anticuerpo
            1. Se separa el complejo Anticuerpo-Hormona:Precipitación, Absorción, Precipitación Inmunológica, Fase Sólida.
              1. Se realiza la medición y se elabora curva patrón
        2. RIA de inhibición
          1. Sin antigeno marcado,Se inmoviliza una cantidad de antígeno en un soporte sólido. Saturar con BSA
            1. Se añade una cantidad de Anticuerpo marcado y el antígeno a medir.
              1. Se eliminan lo que no ha sido unidoy se determina la cantidad de anticuerpo marcado que se ha inmovilizado
                1. Curva anticuerpo marcado inmovilizado contra la concentración de antígeno soluble.
          2. RIA IRMA
            1. Se inmoviliza una concentración del Ac1 en un soporte sólido
              1. Se añade la muestra problema de Ag
                1. Se añade Ac*2 que se una a otro epítopo del Ag.
                  1. Eliminación del Ac*2 no unido.
                    1. Se determina la cantidad de anticuerpo marcado unido.
          3. Análisis inmunoenzimáticos
            1. Wenstern blot
              1. Las muestras pueden ser de un tejido o de cultivo celular, identifica una sola proteína dentro de una muestra biológica, especificidad por la unión de anticuerpo por un solo epítopo del antígeno
                1. Electroforesis en gel poliacrilamida.
                  1. Transferencia - Difusión simple - Transferencia al vacio - Electrotransferencia
                    1. Bloqueo
                      1. Detección: Según el sustrato puede realizarse la detección
                        1. Exploraciones secundarias
              2. ELISA
                1. Anticuerpos marcados
                  1. directo
                    1. Fijación al soportede antígenos específicos
                      1. Adición de anticuerpos marcados
                        1. lavado y adición del sustrato
                          1. lectura
                    2. indirecto
                      1. Fijación al soporte
                        1. Adición de suero problema
                          1. Adición de anticuerpos marcados, más sustrato
                            1. letura
                      2. Sándwich
                        1. Fijación al soporte
                          1. Adición de la muestra
                            1. Adición de anticuerpos específicos
                              1. adición de sustrato y lectura
                      3. Técnica de inmunoensayo en el cual un antígeno se detecta mediante un anticuerpo enlazado a una enzima
                        1. Anticuerpos sin marcar
                          1. competitivo
                            1. Fijación al soporte
                              1. Adición de una mezcla de antígenos del anticuerpo
                                1. Adición de un sustrato y lectura
                      4. Quimioluminiscencia
                        1. Fluoroinmunoensayo
                          1. Fluoroinmunoanalisis de polarización de fluorescencia
                            1. Inmunoanalisis de fluorescencia con el sustrato marcado (SLFA)
                              1. Fluoroinmunoanalisis de disociación aumentada por lantánidos (DELFIA)
                                1. Inmunoanalisis de transferencia de energia de fluorescencia (FETI)
                                2. Emisión de radiación electromagnética producida por una reacción química
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