EXTRACCIÓN DE ADN

Valentina Sanchez Luna
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Valentina Sanchez Luna
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EXTRACCIÓN DE ADN
1 OBJETIVO
1.1 Realizar extracción de ADN de tejidos animales y vegetales mediante diferentes métodoa
2 INTRODUCCIÓN
2.1 El ADN es la parte fundamental de los cromosomas, constituídas por diminutos filamentos se han ideado varios métodos para realizar esta extracción que se basa fundamentalmente en la liberación de membranas con sustancias lipídicas para capturarlas en medios adecuados de pH.
3 MATERIALES Y REACTIVOS
3.1 Muestra vegetal o animal
3.1.1 Batidora o picadora
3.1.1.1 Cloruro de sodio
3.1.1.1.1 Detergente líquido o champú
3.1.1.1.1.1 Colador
3.1.1.1.1.1.1 Ablanda carnes, zumo de piña
3.1.1.1.1.1.1.1 Agua (destilada o mineral
3.2 Nevera
3.2.1 Varilla fina
3.2.1.1 Vaso de precipitado
3.2.1.1.1 Tubo se ensayo
3.2.1.1.1.1 Bicarbonato de sodio
3.2.1.1.1.1.1 Alcohol isolámico y etílico a 0·C
3.2.1.1.1.1.1.1 Pipeta
4 MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE ADN CASEROS
4.1 3. 1 Mezclar sal normal, bicarbonato de sodio, agua mineral y detergente líquido en un vaso de precipitado. Mantener en frío.
4.1.1 3. 2 Agregar solución anterior a un tubo de ensayo y escupa 10 veces.
4.1.1.1 3. 3 Con el tubo inclinado, agregar alcohol isolámico frío.
4.1.1.1.1 3. 4 Con la punta de una varilla delgada, mediante un movimiento hacia delante y hacia atrás, se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
4.2 4. 1 Disolver sal y detergente líquido en un vaso de agua.
4.2.1 4. 2 Cortar en cuadritos la zona central de una cebolla y agregar a la anterior solución.
4.2.1.1 4. 3 Depositar la mezcla en una picadora a máxima velocidad durante 30 segundos.
4.2.1.1.1 4. 4 Filtrar el picado, obteniéndose el extracto y deposítelo hasta un cuarto de un tubo de ensayo.
4.2.1.1.1.1 4. 5 Añadir al tubo de ensayo otro poco de zumo de piña mezclar.
4.2.1.1.1.1.1 4. 6 Agregue un volumen de alcohol muy frío igual al del filtrado, cuidadosamente, haciéndolo resbalar por las paredes del vaso.
4.2.1.1.1.1.1.1 4. 7 Deje reposar durante unos minutos hasta que se forme una zona turbia entre las dos capas.
4.2.1.1.1.1.1.1.1 4. 8 Introducir una varilla y muévala adelante y atrás, para extraer las fibras blancas de ADN.
4.3 1. 1 Disolver cloro en agua.
4.3.1 1. 2 Cortar material vegetal o animal en cuadritos y triturar hasta obtener un macerado
4.3.1.1 1. 3. Mediante un filtro extraer macerado de lo anterior
4.3.1.1.1 1. 4.. Añadir extracto a la solución salina, agregar detergente líquido, mezclar y deja en refrigeración
4.3.1.1.1.1 1. 5. Depositar en un tubo de ensayo la anterior mezcla y añadir ablandador de carne o de zumo de papaya o piña y agitar suavemente.
4.3.1.1.1.1.1 1. 6. Añadir alcohol isoamílico a 0ºC, delicadamente con el tubo de ensayo inclinado, dejar reposar
4.3.1.1.1.1.1.1 1.7 Con la punta de una varilla de vidrio delgada, justo debajo de la separación entre el alcohol y la mezcla, se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
4.4 2.1 Preparación de solución de Buffer: Mezclar agua destilada, sal de cocina, bicarbonato de sodio, champú o detergente. Mantener refrigerado.
4.4.1 2. 2 Cortar en cuadritos la muestra de la que se va a extraer el ADN, triturar en picadora.
4.4.1.1 2. 3 En un vaso de precipitado mezclar el triturado con el buffler, agitar fuerte. Por filtración. Retire los restos vegetales.
4.4.1.1.1 2. 4 Mezclar ablandador de carne y zumo de piña. Agitar suavemente.
4.4.1.1.1.1 2. 5 Introduzca una delgada varilla de vidrio para observar como se enrollan los fragmentos de ADN
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