TÉCNICAS DE CULTIVO DE CÉLULAS ANIMALES IN VITRO

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Mauricio Martínez
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TÉCNICAS DE CULTIVO DE CÉLULAS ANIMALES IN VITRO
  1. Es la una de las técnicas más empleladas actualmente en investigación biomédica y biológica
    1. Para el tratamiento de diversas enfermaedades
    2. Se llevan una amplia gama de investigaciones en áreas
      1. tisular
        1. celular
          1. bioquímico
            1. molecular
      2. El principal objetivo
        1. es estandarizar e implementar procedimientos que permitan mantener y expandir una población de células de interés
        2. Estados de un cultivo primario se puede clasificar en cuatro estados
          1. 1. Adaptación de las celulas
            1. 2. Fase de crecimiento exponencial hasta 30
              1. 3. Disminución en la tasa de crecimiento
                1. 4. Senescencia y muerte por parte de las células y del cultivo
                  1. Se pueden presentar en cualquier fase
            2. Se deben implementar ensayos estandarizados de
              1. Viabilidad
                1. Apoptosis
                  1. Senescencia celular
                    1. grandes variaciones de temperatura
                    2. estrés oxidativo
                      1. falta de nutrientes
                        1. confluencia celular
                          1. exceso de utilización de enzimas proteolíticas (tripsina, dispasas, colagenasas, etc.)
                            1. presencia de agentes nocivos
                              1. contaminación del medio
                                1. tipo de células
              2. APTOSIS
                1. se define como un proceso coordinado, dependiente de energía que involucra la activación de un grupo de cisteín proteasas denominadas ‘caspasas’
                  1. Surgen interacciones de proteinas
                    1. Entrecruzamientos
                      1. Rompimientos
                        1. Síntesis
                          1. Degradación
                            1. Reordenamiento de estructuras celulares
                        2. Logrando su degradación para ser "reciclada".
                          1. Este proceso toma en promedio 2 o 3 horas
                            1. Si se produce alteraciones en un subcultivo
                              1. Afecta el índice mitótico promedio de las células
                                1. y luego la activación del proceso apoptótico
                      2. Protocolos para el diseño in vitro de cartílago articular animal basados en métodos de ingeniería de tejidos
                        1. Tiene funciones biomecánicas especificas que lo hacen el tejido mas importante en el mantenimiento de la homeostasis articular.
                          1. dado el hecho de que el tejido de reparo que se crea es biomecánicamente subóptimo con relación al nativo
                            1. r lo anterior, la ingeniería de tejidos ofrece una alternativa basada en la creación de un nuevo tejido con características biológicas y biomecánicas similares a las originales
                        2. Tratamiento en diabetes y la resistencia a la insulina
                          1. se han realizado usando modelos animales tales como ratas, ratones o conejos normales
                            1. tratados con estreptozotocina o aloxano para destruir las células β pancreáticas productoras de insulina
                              1. La DM y la RI pueden presentarse espontáneamente en diversos mamíferos, incluyendo animales domésticos, ganado y animales mantenidos en cautiverio
                                1. estos animales representan todo el rango de posibilidades, predominando en algunos animales la RI mientras que, en el extremo opuesto, otros sufren disfunción de las células β
                          2. Técnicas para la detección de apoptosis y senescencia celular in vitro
                            1. dada la importancia de establecer la metodología más adecuada para su implementación en investigación biológica y biomédica que usa este tipo de células como medios de diagnóstico, experimentación y obtención de alternativas terapéuticas
                            2. SENESCENCIA CELULAR
                              1. Se define como
                                1. la pérdida irreversible de la capacidad proliferativa de células que se mantienen en un estado metabólicamente activo necesario para su supervivencia
                                  1. A partir de ahí se ha propuesto que las células poseen un potencial replicativo finito, denominado el límite de Hayflick
                                    1. Presenta un fenotipo particular
                                      1. Moforlogía aplanada y alargada
                                        1. presenta focos de heterocromatina y la acumulación de gránulos de lipofushina
                                2. El fenómeno se desencadena por dos vías
                                  1. vía p53
                                    1. p53 es degradada por el complejo MDM2
                                    2. vía pRB
                                      1. es activada por la proteína p16
                                        1. después de estrés celular o daño al ADN
                                  2. NECROSIS
                                    1. ocurre porque en el centro del andamio hay una deficiencia de entrega de nutrientes y remoción de desechos
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