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19653851
Método de DNS
Descrição
Cuantificación de azúcares reductores
Sem etiquetas
dns
Fluxograma por
Michelle Torrijos
, atualizado more than 1 year ago
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Criado por
Michelle Torrijos
mais de 4 anos atrás
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Resumo de Recurso
Nós do fluxograma
a) Añadir a 6 tubos Eppendorf 100 µL de reactivo DNS.
b) En otro tubo Eppendorf, agregar 950 µL de la solución de sacarosa a 30 g/L + 50 µL de la enzima a 3 mg/mL
c) Inmediatamente después de mezclar la enzima con la solución de sacarosa, tomar una muestra de 100 µL
d) Vaciar la muestra en uno de los 6 tubos Eppendorf que contiene 100 µL de DNS. Este tubo será el blanco o T0
e) Después de mezclar la enzima con la solución de sacarosa, medir 30 segundos y nuevamente tomar una muestra de 100 µL
f) Vaciar la muestra en otro de los 6 tubos Eppendorf que contiene 100 µL de DNS. Ese será el T1.
g) Seguir midiendo el tiempo, ahora para 1 min,1.5 min, 2 min y 3 min después de que la reacción empezó.
h) Vaciar cada muestra de 100 µLtomada en un tubo con 100 µL de DNS. Se tendrán T2, T3, T4 y T5.
i) Llevar a ebullir los 6 tubos Eppendorf a baño María durante 5 minutos.
j) Colocarlos en agua fría durante aproximadamente 5 min o hasta que se enfríen.
k) Agregar 1 mL de agua destilada a cada tubo y vaciar el contenido en celdas.
l) Leer las absorbancias de las muestras a 540 nm recordando que el T0 es el blanco y registrarlas.
m) Almacenar en refrigeración a 4°C para su posterior uso.
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