DNA-Analysen PCR (Polymerase Chain Reaction/ Polyymerase Kettenreaktion): Vervielfältigung von DNA-Abschnitten
-Am Tatort DNA-Spuren
-einzelne Sequenzen DNA typisiert, passen nur einem Menschen --> genetischer Fingerabdruck
-nicht codierter Bereich (nur Introns): Loci, kleiner DNA Stücke wiederholen sich tandemartig (im Gespann)
--> Short Tandem Repeats (STR) 6-7 ca.
-Anzahl Wdhs variiert unter den Menschen
--> Anzahl wird für den genetischen Fingerabdruck benutzt
-STR an verschiedenen Stellen im Genom: diese Loci/Orte haben Namen wie vWF, FGA, THO1, D1S80
--> Abkürzungen stehen für das Gen, wo sich Loci befindet
-Basensequenz, die Loci einrahmen beim Menschen gleich
--> passende Primer (komplementär an eine Stelle des Abschnittes) werden konstruiert
-Reaktionsansatz: isolierte DNA (STR), Nucleotide(um komplementären STrang aufzubauen), Puffer (ph-Wert stabil --> Polymerase kann gut arbeiten), zwei passende Primer, hitzstabile DNA-Polymerase (Taq-Polymerase)
-Thermocycler (plastikröhrchen mit Reaktionsansatz hinein) wiederholt Temperaturen zyklisch

Bei 95° wird doppelsträngige DNA gespalten (denaturierung), wird erhitzt für ca. 20-30 sek.
--> Wasserstoffbrücken zwischen Basen werden zerstört
Bei 60° lagern sich die Primer an (Hybridisieren)
--> schnelles Herunterkühlen, damit sich Einzelstränge nich erneut verbinden (20-40sek)
-Temp. hängt vom Primer ab, von Länge und Sequenz (Nucleotiden)
Bei 72° verlängert Taq-Polymerase den Komplementärstrang (Polymerisieren)
-in 5´Richtung
-30sek./500 Basenpaare

-Nach einem Zyklus DNA verdoppelt
-Vorgang wir n mal wiederholt
-nach 20 Zyklen 1.000.000 Kopien

-Gelelektrophorese:sichtbar machen der DNA Stücke (DNA eigentlich unsichtbar --> einfärben blau) und trennen diese voneinander, sortieren nach Größe
-elektrisch aufgeladenes Gelmatrixfeld mit einem Plus- und einem Minuspol
-DNA in Probentaschen in der Matrix
-Moleküle/DNA Fragmente sind unterschiedlich groß und damit auch unterschiedlich stark oder schwach geladen
-wandern aufgrund Ladung weiter oder kürzer
-Gel beeinflusst ebenfalls wie weit DNA-Moleküle wandern
-kürzere wandern weiter, längere bleiben hängen
-DNA=elektronegativ geladen --> wandert so durch Gelmatrix in Richtung Pluspol
-an Seite Matrix eine Vergleichsbande
-Matrix mit Ethidiumbromid einfärben --> unter UV Licht werden Bande sichtbar
-Gebrauch:

Kriminalfälle: Vergleichen der am Tatort gefundenen DNA mit der des Verdächtigen
Vaterschaftstest: kein identisches Bandenmuster, aber Übereinstimmungen, Vergleichen des Bandenmusters von Kind und infragekommenden Vater
zwei unterschiedliche Banden, 1 von der Mutter 1 vom Vater
eine Bande: Mutter und Vater gleiche repeats, liegen übereinander (homozygot)

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erhöht Biologie (Genetik) Notas sobre DNA Analysen, criado por Greta Warnke em 16-04-2015.

DNA Analysen