Técnicas de genética/citogenética

Gen

Es una unidad de información caracterizada por ser una secuencia de nucleótidos con una región promotora. Es la unidad básica de la herencia. Pueden codificar para macromoléculas, como el ARNt, el ARNr o el ARNm, y esta última puede traducirse a proteínas.  Las variantes génicas dentro de la población se denominan alelos. Al ser diploide, el ser humano puede portar (en general) hasta dos alelos en una misma persona.  Los genes son parte de una molécula de ADN que se superenrolla junto con proteínas (histonas) en unidades macromoleculares mucho mayores llamadas cromosomas.  Su tasa de transcripción está regulada por secuencias silenciadoras e intensificadoras, sensibles a influencias señalizadoras (inducciones por ejemplo).

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Cariotipo

Es una técnica de la citogenética clásica, en la cual se obtienen los 46 cromosomas de una célula nucleada del paciente de interés y se los ordena según su morfología y tamaño característicos. Se los observa al microscopio óptico. Utilidad: Diagnóstico de cromosomopatías evidentes, tales como alteraciones numéricas (aneuploidías, como lo son las trisomías o la monosomía de Turner) o estructurales que afecten un gran número de pares de bases (deleción, inserción, translocaciones, etc). Ventajas: Accesible y muy sensible para aneuploidías o diagnóstico del sexo cromosómico (XX o XY). Desventajas: No detecta alteraciones estructurales de pocos pares de bases y no es útil en el diagnóstico genético. Inespecífica.  

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FISH

La hibridación (adherencia por complementariedad de bases) in situ (en el lugar) por fluorescencia (usa una sonda, que es una secuencia de bases que se hibrida a la secuencia que se está buscando y que en el caso de estar presente emite una luz fluorescente) es una técnica de citogenética que se utiliza sobre el cariotipo antes descripto. Utilidad: Diagnóstico rapido de aneuploidías parciales, y alteraciones estructurales no evidentes en el cariotipo (microdeleciones, inserciones, translocaciones, etc).  Su ventaja y su desventaja al mismo tiempo es su especificidad. Sólo sirve si se conoce la secuencia de interés. También se precisa un microscopio de fluorescencia. No es útil en alteraciones genéticas puntuales o que abarquen muy pocos pares de bases.

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PCR

Técnica de biología molecular cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN de interés. Utilidad: Tiene variados usos y aplicaciones, hay dos de particular importancia: el diagnóstico médico y la recuperación de muestras forenses para, por ejemplo, la identificación de personas.  Ventajas: Es muy sensible, requiere una mínima cantidad de ADN para obtener un gran número de copias. Al diseñarse cebadores específicos para lo que se está buscando, permite detectar fácilmente cualquier mutación en la secuencia promotora (si está mutada, no copia). También esta especificidad es útil en el diagnóstico microbiológico (virus, bacterias, etc). Limitaciones: Es muy específica, por lo cuál se debe saber qué es lo que de busca. Si se contamina la muestra la técnica pierde toda sensibilidad.  La "PCR en tiempo real" o RT-PCR permite cuantificar la muestra de ADN/ARN, esto es útil para medir carga viral en pacientes HIV+.

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Secuenciación

Es un conjunto de métodos y técnicas bioquímicas cuya finalidad es la determinación del orden de los nucleótidos (A, C, G y T) en un oligonucleótido de ADN, puede ser el mismo un gen o varios genes. Utilidad: Diagnóstico genético. Diagnóstico microbiológico, diferencia cepas distintas de microorganismos del mismo género o especie Ventajas: Sensible a mutaciones puntuales. Desventajas: No es muy accesible por sus costos y su complejidad. No sirve para alteraciones cromosómicas o multigénicas.

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Microarreglo (microarray)

Es una técnica muy compleja que, esquemáticamente, compara un genoma diploide normal con la muestra del paciente que se coloca en la máquina que realiza la técnica. Imagínenlo como el juego de las 7 diferencias.  Utilidad: Investigación. Diagnóstico de enfermedades de causa multigénica. Ventajas: Permite el estudio de muchos genes en simultáneo, pudiendo encontrar numerosas mutaciones de una sola vez.  Desventajas: Prácticamente no existe en el país. Presenta costos muy elevados. Todavía no se precisaron todas sus aplicaciones posibles a la medicina. Es para el futuro, no tanto para ahora. 

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