Carotenos

Inicio

Pesamos las muestras (previamente trituradas)

Añadimos 2mL de MeOH HPLC y 1,5mL de Tris-HCl

Ver preparación del Tris-HCl

Agitamos durante 5 minutos a 4ºC

Añadimos 4mL de cloroformo

Centrifugamos 10 minutos a 700 rpm

Recuperamos la fase inferior

Fase recupetrada

Resto

Matraz topáceo de fondo redondo

Repetimos la extracción 5 a 8 veces con 3mL de cloroformo

Evaporamos el cloroformo con el rotavapor a 40ºC

Basura

El resto se disuelve en 3,6ml de MeOH de pureza HPLC

Añadimos 400 uL de KOH al 60% y agitamos en atm. anóxica

Se deja reposar en oscuridad toda la noche

Calentamos a 50ºC durantre 20-30 minutos

Trasvasamos a tubos de 15mL

Limpiar matraces; 2mL de agua MiliQ, 2mL de solución A, 1mL de cloroformo y 4mL de sol. A

Agitamos y recuperamos la fase superior. A 4ºC y oscuridad

Añadimos 2mL de sol.A, agitamos y pasamos la fase superior al Falcon

Repetir hasta que la Sol. A sea incolora

Medimos el volumen recuperado de manera precisa

Y añadimos Sol.A hasta conseguir un volumen conocido

Pinchamos en el UPLC

Miramos su absorbancia (270-540nm)

Fin