Extracción poliaminas

INICIO

Pesar 0,5 g de tejido triturado y congelado

Añadir 2,5mL de HClO4 5%

Vortex

Añadir 10 uL de hexanodiamina a 100ppm

Vortex

Reposo 1 hora en hielo

Centrifugar 20 minutos a 4500 rpm y a 4ºC

Pasar el sobrenadante a un tubo Falcon nuevo

Añadir 1,66mL de NaOH 2M

Añadir 10 uL de cloruro de benzoílo

Vortex

Derivatizar: 20 minutos a Tº ambiente

Añadir 3,33 mL de NaCl saturado

Vortex

Añadir 2 mL de dietil-éter

Vortex 1 minuto

Dejar reposar

Extraer el sobrenadante a un tubo nuevo (vidrio)

Eliminar el disolvente con flujo de N2

Resuspender en 130 uL de metanol

Filtrar

Pasar a viales de vidrio de UPLC con inserto

Pinchar 4 uL con el programa 30-50 % ACN 40ºC

FIN