Inmunodifusión Radial (IDR)

Inmunodifusión Radial IDR

Fundamento

La inmunodifusion radial es una tecnica específica para la remoción de agentes infecciosos del cuerpo debido a que cada anticuerpo puede unir más de un antígeno ya que puede ser unido por más de una molécula de anticuerpo grandes complejos macro moleculares

la precipitación de estos complejos macro moleculares en un medio gel osado es utilizada en la técnica de inmunodifusión radial para cuantificar diversas proteínas plasmáticas en muestras biológicas

Tecnica aplicada para los complejos macromoleculares en un medio gelosado

Materiales

Pipetas

Suero control

Muestra

Apectos a considerar

las placas de ideas se conservan en heladera de (2 a 8 C) sin congelacion

las placas deben estar siempre en posición horizontal tanto durante su transporte como en su almacenamiento

Recomendaciones para el manejo de las placas gelosadas

Si se congela la placa debe ser descartado

No colocar las placas en contacto con el fondo de la heladera ya que pasan los tubos refrigerantes

Evitar invertir la placa para que el líquido no caiga en los pocillos una vez retirada la tapa

¿Cuanto volumen de muestra de dispensión en cada pocillo?

5 micro litros

Utilizar una pipeta hamilton o una pipeta automática de volumen fijo de 5 microlitros o una pipeta automática de rango acotado por ejemplo de 0 a 10 microlitros

Tener en cuenta

Que el uso de pipetas de rango muy amplio puede generar errores en el dispensado de cantidades

Inicio del procedimiento

Siembra de muestra y suero control

en una muestra de suero fresco:

la técnica de piquete o reverso brinda mayor seguridad, es aconsejable usar microtips en lugar de los tipo amarillos

Recomendaciones

evitar usar sueros lippemicos hemolizados o que presenten partículas en suspensión debido al pequeño volumen y a la viscosidad de la muestra

La técnica de reverso consiste en

1- presionar el émbolo hasta el último tope para tomar la muestra

2- desplazarlo hasta el primero al dispensar de esta manera quedará algo de muestra en el pocillo

3.Descartar el TIP

Siembra 5ml de suero contro y a continuacion las muestras

Recomendaciones

no tocar los bordes de los pocillos al retirar la pipeta}

una vez sembrado el suero control colocaremos un pequeño trozo de algodón humedecido en el centro de la placa y la cerraremos

Al cerrar ajuste la tapa de la palca

Recomendaciones al incubar la muestra

Incubar la placa en forma invertida en tiempo indicado en el inserto a temperatura ambiente y en cámara húmeda

evitar los cambios bruscos de temperatura durante la incubación en particular el descenso de la misma durante la noche

difundir las muestras 12 o 24 horas más cumplido en tiempo de incubación procederemos a leer los resultados

Lectura de resultados

Lupa graduada

Regla de lectura

1-centrar el pocillo a leer con la línea central vertical

2-ubicar el halo en la parte superior de la regla donde las líneas oblicuos se encuentran más separadas

3- bajando la placa hasta que el borde exterior del halo toca las líneas laterales de la regla

4- el halo debe quedar a la vista es decir que la línea de la regla debe apoyar en el borde del halo y no taparlo

5- el halo debe quedar a la vista es decir que la línea de la regla debe apoyar en el borde del halo y no taparlo

Recomendaciones: evitar el uso de una regla lineal común ya que el error que se comete es muy grande

La medición será más simple y más exacta

Obtener los diametros de los halos usaremos la tabla diámetro versus concentración que viene provista junto con la placa para encontrar las concentraciones correspondientes a las muestras

primero verificar que el control dio el resultado esperado

encontrar los valores de las muestras incógnita

Curva de calibración

Elimina la fuente de errores sistematicos

3 puntosde la curva

3 pocillos de la placa

Buscar el rango de la placa y buscar la concentración del suero control

Punto (disolución 1/4 de suero control)

Siembra del control puro

Siembra de 3 veces el suero control

Difusión de siembra

Facultad de Ciencias Médicas y de la Salud

Licenciatura en Ciencias Médicas.

Laboratorio Inmunología Sección: B

Licda. Amanda Agustín

Marcos Rolando Pocón Tepeu

200-18-2334