Karteikarten
MET Preparação
Karten in diesem Stapel (16)
- 1Quais são as etapas da preparação?1 Fixação
2 Pós-fixação
3 Contrastação em bloco (opicional)
4 Desidratação
5 Infiltração
6 Inlcusão
7 Ultramicrotomia
8 Contrastação - 2Qual a função da fixação?Fazer ligações cruzadas das proteínas das membranas celulares
- 3Quais os tipos de métodos de fixação e qual a diferença entre eles?Físicos (não alteram a morfologia celular) e químicos (alteram a morfologia celular)
- 4Como é feita a criofixação convencional?1 Fixação química inicial com glutaraldeído e paraformaldeído
2 Fragmento de material é impregnado com concentrações crescentes de glicerol
3 Fragmentos são colocados em suporte de ouroirídio e imersos em nitrogênio líquido - 5Dê exemplos de fixadores aditivos e não aditivosTetróxido de ósmio e etanol
- 6O que é feito na fixação química?Adição de Glutaraldeído (2,5%) + formaldeído (2 a 4%) em tampão PHEM (1x, pH 6,9 a 7,2) ou Caco (0,1M, pH 7,2 a 7,4)
Cloreto de cálcio (CaCl2) (3mM) → 2 horas em temperatura ambiente ou 12h à 4°C (não usar com PHEM) - 7Qual a função da pós-fixação?Promover ligações cruzadas nos lipídeos das membranas
- 8O que é feito na pós-fixação química?- Lavar 3x com o último tampão ou CBS + CaCl2 (3mM) → tempo depende do material da amostra
Tetróxido de ósmio (OsO4) (1%) + Ferrocianeto de potássio (0,8%) + Cloreto de cálcio (CaCl2)** em tampão Caco (0,1M) pH 7,2 → 15, 30 ou 60min em 4 a 10°C (geladeira) - 9O que é feito na contrastação em bloco?Acetato de uranila (1-2,5%) + acetona ou etanol (25%) → 1 hora (4-10°C)
- 10O que é feito na desidratação?Soluções crescentes de etanol ou acetona
- 50% → 10min
- 70% → 10min
- 90% → 10 min
- 100% → 10 min (3x)
- Etanol: última troca com óxido de propileno - 11Por que é feita a desidratação?A água é gradualmente substituída por um solvente orgânico como etanol ou acetona. Isso evita a formação de cristais de gelo e a deformação das estruturas celulares devido a tensão superficial
- 12O que é feito na infiltração?Amostras infiltradas com concentrações crescentes de Epon diluído em acetona ou óxido de propileto ou etanol até Epon puro com DMP-30
- 1:3 → 1-8h
- 1:2 → 1-8h
- 1:1 → 8-12h
- 2:1 → 8-12h
- 3:1 → 12-24h
- Resina pura → 12-24h - 13O que é feito na inclusão?Incluir as amostras em Epon com formas apropriadas → 48-72h (60°)
- 14O que é feito na ultramicrotomia?São realizados cortes da amostra com espessura de 70-80nm (PRATA), cortes coletados na água e posicionados em grades de níquel ou ouro,
- 15O que é feito na contrastação?Acetato de uranila 5% e citrato de chumbo
- 16Para que é feita a contrastação?A presença de metais pesados ajuda a reduzir os efeitos de carregamento e os danos do feixe durante a imagem. O carregamento ocorre quando amostras não condutoras acumulam carga elétrica estática sob o feixe de elétrons, o que pode distorcer as imagens. Manchas de metais pesados ajudam a dissipar essa carga e estabilizar o espécime
Informationen
- Beschreibung
- Karteikarten am MET Preparação, erstellt von Ane Nobre am 18/05/2024.
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- Ane Nobre
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