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Viabilidad y recuento
Karten in diesem Stapel (78)
- 1Problemas del crecimiento excesivo de celulas?agotar nutrientes
acumula celulas apoptopicas o nectróticas
se inhibe el crecimiento por contacto
diferenciación celualr promiscua por contacto - 2Cuando doblan las celulas su numero en el cultivo?24-48 horas
- 3Que proporción de celulas se pasan y cuales se quedan?suele cambiarse solamente 2/3 del medio, dejando 1/3 del medio inicial
para que el cultivo prospere mejor,
ya que los cultivos necesitan de factores u hormonas - 4% de confluencia?80-90%
- 5que es la tripsina?una proteasa que digiere las proteínas celulares implicadas en la adhesión
celular. - 6funciona la tripsina con suero?no
el suero tiene inhibodores de tripsina y cationes divalente
hay que usar EDTA para quitar los cationes divalentes - 7como afectan las diferentes condiciones de cultivo?pueden dar lugar a diferntes fenotipos
- 8hemocitómetro, como por ejemplo unacamara de Neubauer
- 9que es una reticula mejorada?un
portaobjetos especializado con cubreobjetos para microscopio. - 10que colorante se usa para la viabildiad celular?el tripan blue
no penetra en el citoplasma
de las células viables. Las células muertas aunque aparezcan intactas, no evitan la penetración del colorante y aparecen azules. - 11Esquema de un hemocitometro?tiene dos superficies pulidas, cada una dividida con 9 cuadrados de 1mm de lado (area de 1 mm^2) y limitado por 3 linas muy juntas
cada cuadaro primario esta dividido en cuadrados de 0,25 mm para facilitar le contaje
hay un espacio de 1 mm de profundidad - 12Cuando el hemocitómetro está cargado correctamente, el volumen de la suspensión celular en un cuadrado primarioes de 0,1 mm3 (1 mm2 x 0,1 mm) ó 1,0x10-4 mL
- 13La concentración total en la suspensión original en un hemocitómetro es?número de células x 10000 x factor de dilución.
- 14Para determinar la viabilidad celular, se mezcla una alícuota de la suspensión celular en un volumen de tampón salino con ...colorante soluble en agua e insoluble en lipidos de membrana como la eritrosina B o el Trypan Blue
- 15que problema tiene el trypan blue?no detecta otras formas de daño celular que afectan a la adhesión y que a la larga llevarán a la muerte a las células que las presenten.
Además tampoco
identifica a las células que están completamente lisadas. - 16Como se hace la tinción con tripan blue?suspender e buffer fosfato salino
colocar en hiehlo hasta que se haga el contaje
se añade tripan blue al 0,4% a un volumen igual de suspensión celular
incubar 5 min - 17concentración del tripan blue¿0,4%
- 18que otros medios de tinción de viabilidad hay?ioduro de propidio
la utilización de contadores electrónicos de células (cell counter)
citometria de flujo - 19problema del contaje manual de celulas?errores humanos
errores de precisión
uso de colorantes peligrosos
erroes en la transcipción de datos, etc - 20Que es un contador coutler?es un aparato utilizado para contar y medir el tamaño de partículas en solución.
se usa para celulas sanguineas, bacterias, jajajaj - 21Como funcina un contador Coulter?tiene uno o más microcanales que conectan dos caamras con uan soulcin electrolitica con una diferncia de potencial
la solución fluye de una camara a otra y arrastras las particulas
al atravear el microcanal, hay un cambio en la resistrenia del liquido
se detecan los aumentos de ressistencia electrica - 22que nos indica la amplitud del cambio en la corriente que atraviesa el microcanal en coulter?volumen de la partícula,
- 23para que srive un hemograma?determinar el número y proporción de leucocitos y eritrocitos
presentes en el organismo. Anteriormente este procedimiento involucraba la preparación de una
muestra sanguínea y su recuento manual bajo el microscopio, un procedimiento que típicamente podía
llevar media hora. - 24para que srive un coulter además de contar celulas?control de calidad de pinturas,
cerámicas, vidrios, preparación de aleaciones y manufactura de alimentos. - 25como se llama el sistema similar a COULTER?CASY
- 26Cual es el principio de coulter?El aumento transitorio en la Impedancia a través del canal por el que circula una corriente
eléctrica es proporcional al volumen ocupado en cada instante de tiempo por la partícula que lo atraviesa (de
izda a dcha). O en otras palabras, el volumen de la partícula es proporcional al área bajo la curva de R vs T. - 27cuantos canales puede tenre coulter?uno
o varios en paralelo, asi reducir el tiempo - 28que permite la citometria de flujoseparar poblaciones celulares y hacer medidas
- 29velocidad de flujo de citometria?500-4000 celulas por segundo
- 30cuantos componentes tiene el citometro?hidraulico
optico
electronico - 31Como se llena la entrada del componente hidraulico del citometro?a presión constante con un fluid envolvente
presión ajustable - 32Como es la diferencia de presión entre el fluido envolvente y la suspensión celular en el citometro de flujola diferencia de presiones entre el fluido envolvente y la suspensión celular alinea las celulas
la presión de inyección debe ser algo superior a la del fluido envolvente. Si es mucho más alto, pasarán juntas varias y no queremos esos - 33Como se calibra el citometro de flujo?'con un enfoque hidrodinámico. Con tinta se calibra
- 34Cuantos detectores hay en el componente optico del citometro?2
uno frontal
otro a 90 grados en una posición lateral - 35que información dan los detectores de la citometria de flujo?Frontal: FSC: detecta la luz difractada, asi que nos da tamaño y volumen
el lateral. SSC: deterta la luz refractada y reflejada, indicando la complejidad interna (forma del nucleo, cantidad de orgnaulos, rugosidad de la membrana, etc) - 36como funciona el fotomultiplicador del citometro?es un sistema de fotocátodos y dinodos y un detector.
el fotomultiplicador recibe los fotones, que se convierte en un electron por los fotocátodos.
el electron incide en un dinodo, arrancando del dínodo varios electrones secundarios, que chocan con el siguiente dinodo generando más electrones y asi sucesviamente - 37como separa un citometro de flujo poblaciones celulares?con fluorescencia SORTER
la señal generda por las celulas al pasar por el laser llega a un sistema electronico informatico
separa las celulas marcadas ya que se corta el flujo de las celulas con un ultrasonido. La celula queda englobada en una gota de agua y llega a un anillo que genera una carga electrcica en las gotas que indique el sistema informático
asi, las gotas son atraidas ahcia un plo que las lleva a un recipiente de celulas no marcadas - 38de que formas se puede marcar una celula para separarla en una citometria?Con marcadores de ADN y conocer su estado del ciclo celular o si esta viva o no
Analizando la membrana celular: identificaf apoptosis y necrosis
con anticuerpos monoclonales marcados con fluorescencia para concoer el fenotipo
usando ab monoclonales marcados con antigenos intracelulares - 39que hace la colagenasa? yla hialuronidasa?liberar la poblacion de fibroblastos embeidos en colageno
separa condroblastos y condrocitos - 40con que capturamos el CA2+EDTA
- 41Para que sirven los estandares deturbidez de mcfarland?se usan como referencia en
suspensiones bacteriológicas para saber que el número de bacterias / UFCpor mililitro, - 42escala de mcfarlan?0,5 a 10
el 0,5 equivale a un poco de turbidez - 43como se hace mcfarland?mezclar soluciones de cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico al 1% en volúmenes específicos,
para asegurar la densidad correcta se puede controlar usando turbidímetros o espectofotómetros - 44como funciona el estandar mcfalrand?comparados con suspensiones de bacterias en solución salina
estéril o en caldos
si la suspensión es muy turbia, se diliuye y se tiene en cuenta el factor de dilución - 45ventajas y desventajas de mcfarlan?no hace falta incubar ni usar equipo especial
no discrimina a las bacterias vivas de las muertas en la solución, por lo que se puede sobreestimar la
población de bacterias. - 46como se mide mcfarland?una relación visual (o empleando técnicas espectrofotométricas ópticas)
espectrofotometría o turbidimetría, creamos una recta patrón,
de forma que vamos a poder detectar la concentración de nuestras diluciones bacterianas - 47en que se basa el metodo de contaje del numero más probalble?determinar si hay una bacteriapartiendo de una muestra y diluyendola mcho
se basa en que una sola celula puede dividirse y crear una colonia
Al calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna célula, se puede estimar el número más probable de microorganismos
presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadística. - 48que cantidad de tubos se usan en el metodo mas probables?5, es el punto entre precisión y economia
- 49como se cuentan los bichos que sondificiles de contar en el metodo de numero más probable?se usa cualquier reaccion de amplificación o reacciónd e catalisis que al menos nos permite determinar su precensica (turbidez, acción enzimática, catalisis quimica, etc)
- 50cunado se usa el metotdo del numero mas pobable?se usa para contar microorganismos difíciles de cultivar en medio sólido, o para determinar el número de células que pueden crecer en un medio líquido determinado, como el análisis
para determinar la contaminación del agua potable, - 51que problema principal tiene el metodo del numero maás probable?la necesidad de un gran número de
copias duplicadas con la dilución adecuada para estrechar los intervalos de confianza.
Sin embargo, es un método muy importante para recuento cuando el orden de magnitud es desconocido a priori y el muestreo es necesariamente destructivo. - 52para hacer uan curva de crecimiento, como se suspenden las celulas inicalmente para celulas en suspensión?deben diluirse a 1x105 células/mL y subcultivarse a tres frascos en
el día 0. Cada uno de esos cultivos debe contarse diariamente, durante al menos 5 días. y anotar tiempo y concentración - 53para hacer uan curva de crecimiento, como se suspenden las celulas inicalmente para celulas adherentes?deben subcultivarse a 1x105 para una placa de 90 mm. Se preparan tres cultivos para cada día a lo largo de 5 días, es decir, 15 cultivos que se inician en el día 0. Esto se debe a que las
células adherentes tienen que tripsinizarse, por lo que, con el fin de hacer un recuento, cada cultivo
sólo puede emplearse una vez. - 54cual es al fase lag del crecimiento?adaptación al cultivo
no hay división
su duración depende de la fase de crecimiento en la que estaban en el momento de pasarlas y su densidad de siembra - 55cual es al fase logdel crecimiento?proliferacion activa, crecimiento y división
aqui se congela - 56cual es al fase estacionariadel crecimiento?o plateau
se va confluyendo
son más sensibles al daño
se limiita el crecimiento, ya sea por falta de nutrientes o acumulación de toxicos - 57cual es al fase de declive del crecimiento?bajan las celulas ya que mueren má celuas de las que nacen
- 58Como es la fase de congelación de un cultivo? en que etapa?en fase exponencial de crecimiento, se centrifugan, se decanta
el sobrenadante y el sedimento se resuspende con la mezcla de congelación y con medio de cultivo en
proporción 1:1. Los criotubos se congelan lentamente en nitrógeno líquido. - 59Que mide un ensayo e citotoxicidad?parámetros asociados a la pérdida de integridad de la membrana
tras la muerte celular
mide proteinas citosolicas que no deberian estar fuera de la celula - 60El objetivo del ensayo de citotoxicidad es determinar sialgún químico o droga hará algún efecto tóxico o carga sobre el medio o material genético de las células causado por letalidad de las células o causado
por diferentes enfermedades. - 61que mide el metodo de citotixicdad MTT?la actividad de una enzima
mitocondrial. - 62Que es el MTT? a cuanta absorbancia se mide?compuesto perteneciente a la familia de sales de tetrazolio, soluble en agua y con color amarillo.
En su forma reducida, es convierte en un formazanos violeta e indisolble
se mide su absorbancia a 570 - 63como funciona el metodo de ensayo de mtt?las celulas tienen deshidrogenasas que actuan sobre el mtt
sobre todo mitocondriales (succinato deshidrogenasa), pero tambien otras.
se generan NADH y NADPH que reduce el mett a formazano y se mide el color por la absorbacnia - 64Como funciona la citotoxicidad por difusion en agar?ensayo cualitativo
mide la integrdad de la membrana
la muetra se analizar para determinar su contenido citotoxico lixiviable tras disfundir por una capa de agarosa
los PM enteros o los troxos se ponen en un medio de cultivo semi solido (3 de agar) y se incuban (no entendí un coño) - 65omo funciona la citotoxicidad por citotixidad de elución?ensayo cualitativo que evalúa la morfología y capacidad
de replicación celular. - 66como funciona la citotoxidida de escalera de ADN?se analiza el adn roto por quimicos
se seapra en electroforesis y se visualiza como una escalera con bormuro de etidio - 67que uso tiene la fragmetnación ensayo de escalera de adn?caracteizar la toxicidad de los quimicos o farmacos
determinar las dosis maximas de quimicos en uso en celulas sin matar muchos bichos - 68como se usa el ensayo de cometas? qué se mide?es una electroforesis en gel unicelular SCGE
detecta daños en el adn
el adn dañado muestra un cometa con cabeza y cola
la long de la cola es la medida desde el punto de mayor intensidad del cometa
el momento de al coal es el producto de la long de la cola y la fracicónd e adn total dentro de la cola - 69que es momento de la cola del ensayo cometa?el producto de la longitud de la cola y la fracción de ADN
total presente dentro de la cola. - 70que quimicos se usa en el ensayo de necrosis? como funcionase hace una citometria de flujo con tincoin de
- ANEXINA V
- Yoduro de propiodio
las apoptopicas tiñen para ambos
Las necroticas solo con PI
las que no tiñen nada estan vivas - 71cuando se considera una celula en necrosisLas células se consideran en la etapa de necrosis si las células
pierden integridad de la membrana y mueren rápidamente debido a la lisis celular cuando se exponen a
productos químicos, drogas, toxinas o antígenos extraño
estan hinchadas
sin integridad de la membrana
metabolismo alteardo - 72relacion entre necrossis y apoptosis?Las células con necrosis no pasan a la etapa de apoptosis. Las celulas necroticas cierran metabolismo, pierden integridad de la membrana y lisan
as células apoptóticas pueden sufrir necrosis secundaria - 73como funciona el ensayo encimático?monitorea el paso de LACTATO DESHIDROGENASA (LDH) por la perdida de la membrana
LDH reducel el NAD a NADH, cambiando el color del medio
tambien se puede usar ATP combinado con biolumiiniscencia. El atp es reactivo para la reacción de la luciferasa - 74como funciona el ensayo proteomico?se mide la expresión de una proteina que hace de biomarcador para el mecanismo toxico particular o via de señalizacón de toxicidad celular
- 75que pruebas se usan en el ensayo proteomico?Inmunofluorescencia, inmunoprecipitación e
inmunotransferencia
se utilizan principalmente para conocer el efecto de los tóxicos en la vía o
mecanismo de señalización de toxicidad celular. - 76en que consiste el nsayo de matriz de expresión'se basa en un chip de mas expresiones genicas (huella dactilar de genes) debido a toxicos
es rapido y sensibles
detecta todos los puntos finales toxicologicos de varios cambios a nivel molecular de la lcelula en un solo ensayo - 77cuantas partes tiene el ensayo de matriz de expresión?1º) imprimir secuencias génicas conocidas en portaobjetos de vidrio y otros soportes solidos
2º hibidriaciónde ADNc marcado con lfuorescencia y que tiene las secuencias desconocidas a interrogar
hibidriar y escanear con un escaner de micromatrices fluorecesntes
segun al intensidad de los diferentes genes, da una medida de la expresión genica - 78que microscopio se usa en el hemocitometro?invertido de contraste de fases
Informationen
- Beschreibung
- C1 Opos Karteikarten am Viabilidad y recuento, erstellt von Aaron Garrido Cabello am 09/03/2026.
- Erstellt von
- Aaron Garrido Cabello · Mär 2026
- Aktualisiert
- 10 Mär 2026
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