Karteikarten
Electroforesis Métodos
Karten in diesem Stapel (21)
- 1ElectroforesisTécnica para la separación de moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual las separa por tamaños moleculares y cargas eléctricas.
- 2FundamentoUna mezcla de moléculas ionizadas y con carga neta son colocadas en un campo eléctrico, estas experimentan una fuerza de atracción hacia el polo que posee carga opuesta, dejando transcurrir cierto tiempo las moléculas cargadas positivamente se desplazaran hacia el cátodo y aquellas cargadas negativamente se desplazaran hacia el ánodo.
- 3GelEl gel consiste de un polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz molécular que dificulta el movimiento de los solutos.
- 4Electroforesis de frente móvil- Los componentes de la muestra estan en toda la disolución, y se determina ópticamente el avance .
- Las sustancias a separar se introducen en un recipiente, disueltas en un tampón de pH y fuerza iónica adecuados.
- Se colocan dos electrodos en sendos brazos del dispositivo, entre los que se crea un campo eléctrico, provocando que las moléculas de proteína cargadas emigren hacia los electrodos de polaridad opuesta. - 5Electroforesis zonal- La muestra se aplica como una mancha o banda y sus componentes migran a través de un disolvente, utilizando además un medio de soporte.
- Los componentes de la muestra se separan, de forma ideal, completamente unos de otros formando zonas discretas.
- Cuando se aplica un campo eléctrico, cada zona comienza a migrar de acuerdo con su propia movilidad.
- Para conseguir esto los diferentes solutos deben presentar velocidades de migración diferentes. - 6Electroforesis continuaLa muestra, al igual que la electroforesis zonal, también se aplica en una zona, pero esta se suministra a lo largo del proceso.
- 7Instrumentación- Fuente de alimentación.
- Cubeta
- Soporte electroforético - 8Soporte electroforéticoPara que esta situación sea estable, tanto al comienzo como a lo largo del proceso de separación, es necesario contrarrestar el efecto de la difusión y las posibles corrientes de convección.
- 9Soportes no restrictivos- El Tamaño de poro no opone impedimento al paso de las moléculas.
- El agar es el ejemplo más representativo y se obtiene a partir de algas marinas y está formado por dos tipos de polisacáridos: la agarosa y la agaropectina.
- La agarosa se utiliza ampliamente sobre todo para la separación de ácidos nucleicos. - 10Soportes restrictivos- El tamaño de poro opone resistencia al paso de las moléculas.
- El ejemplo característico son los geles de poliacrilamida.
- Estos geles son medios porosos en los que el tamaño de poro es similar al de las proteínas, de tal modo que existe un efecto de tamizado molecular y la separación electroforética depende de la densidad de carga de las moléculas y de su tamaño. - 11Electroforesis zonal en papel- La muestra se aplica sobre una tira de papel filtro humedecido con una disolución tampón, bien en el centro o en cualquiera de los extremos del papel, dependiendo de las sustancias a separar y del pH del tampón.
- Los extremos de la tira se sumergen en dos recipientes separados que contienen la disolución tampón y en los que se hallan colocados los electrodos.
- Se conectan los electrodos a una fuente de tensión continua y se aplica una diferencia de potencial durante el tiempo adecuado.
- Al aplicar una corriente directa, las moléculas cargadas de la mezcla emigran hacia los electrodos de polaridad opuesta formando bandas en el papel. - 12Electroforesis capilarHPLC + ELECTROFORESIS
Permite separar bastante bien las biomoléculas donde el HPLC es menos eficaz, y compuestos de pequeña masa molecular, que son difíciles de estudiar con los procedimientos clásicos de electromigración de soporte. - 13Instrumentación Electroforesis capilar- Un capilar lleno de amortiguador de sílice fundida, normalmente con un díametro interior de 10 a 100µm y una longitud entre 400 y 100cm.
- Electrodos de platino.
- Detector.
- Fuente de poder. - 14Métodos de detección Electroforesis capilar- UV-VIS: Mide la intensidad de la luz que pasa a través del capilar en una pequeña zona en la que se ha eliminado el revestimiento opaco.
- Fluorescencia: Para analitos portadores de un fluoróforo. - 15Flujo electroosmóticoVilli
- 16Tipos de Electroforesis capilar- En zona o disolución libre (CZE).
- Electrocinética micelar (MEKC).
- En gel (CGE).
- Isoelectroenfoque capilar (CIEF). - 17Tipos de Electroforesis capilar
- 18Aplicaciones Electroforesis Capilar- Separación de proteínas.
- Encontrar mutaciones en DNA.
- Análisis de iones.
- Industria farmaceútica.
- Aplicaciones forenses. - 19Electroforesis en GelEmpleada en la separación de moléculas (DNA y proteínas).
- 20Geles de agarosaLa agarosa es un polisacárido (originalmente obtenido de algas) cuyas disoluciones (típicamente de 0.5 a 2 %) poseen la propiedad de permanecer liquidas por encima de 50 ° C y formar un gel, semisólido al enfriarse.
- 21Geles de poliacrilamidase forman por polimerización de la acrilamida, capaz de ser preparado de forma rápida y reproducible. Forma, además, geles transparentes con estabilidad mecánica, insolubles en agua, relativamente no iónicos y que permiten buena visualización de las bandas durante un tiempo prolongado.
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- Karteikarten am Electroforesis Métodos, erstellt von Flor Casillas am 29/11/2017.
- Erstellt von
- Flor Casillas
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