Ohne Titel

METODOS

DIRECTOS

INDIRECTOS

Reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del huésped:

Detectan anticuerpos específicos antivirales por técnicas inmunológícas

Western Blot

Diagnostica cual es el agente especifico ante una infección

Las proteínas virales son separadas mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones desnaturalizantes y se colocan en membrana celulsa Una vez completada esta operación la proteínas de interés son reveladas por el agregado de un anticuerpo específico.

Ejemplos:

Rubeola

Citomegalovirus

Hepatitits A

Inmunofluorescencia indirecta

Enzimoinmunoanalisis

Metodo de "Sandwich"

Se incuba el suero paciente con células infectadas y no infectadas

1.Los Ag se inmovilizan sobre una base de pocillo o placa

2. Se añade el suero de estudio

3. Se incuban

4. Se revela antígeno presente reacción Ag - Ac

5. Se añade un segundo anticuerpo, generalmente policlonal, dirigido contra el antígeno

6.Se añade un tercer anticuerpo, dirigido contra el segundo anticuerpo, marcado con enzima

7.Se añade sustrato (incoloro)

8.Actúa enzima sobre sustrato

Aparece color se puede medir intensidad (colorímetro)

Se realiza un lavado con buffer PBS y se agrega un Ac antiIgG humano conjugado con isoticianato de floreceina que se vuelve fluorescente y se une a los Ac si la reacción es positiva

Se pone en contacto a la muestra que contiene el antígeno del organismo bajo estudio y a un anticuerpo monoclonal con fluoresceína dirigido contra dicho organismo

Enzimoinmunoanalisis

Directa

Inmunofluorecencia

Directa

Si se encuentra presente el Ag entonces se formara complejo antígeno-anticuerpo

Antígeno propio de la membrana celular o partículas insolubles son aglutinadas directamente

Test de aglutinación

Mezcla de antisuero con sangre y observcion de la presencia de aglutinción

Fijación al soporte insoluble de antígenos específicos.

Lavado para eliminar los antígenos fijados deficientemente o no fijados.

Adición de un substrato sobre el que sea capaz de actuar la enzima marcadora. Lectura visual o colorimétrica del producto final coloreado.

Adición de anticuerpos marcados con una enzima; si los anticuerpos reaccionan con los antígenos, el complejo quedará solubilizado.

Lavado para eliminar los anticuerpos marcados que no hayan reaccionado.

Cámara de recuento de Petroff Hauser

Brock, D. Clínica y Diagnóstico Microbiológico. Biología de Microorganismos. Prentice Hall, 1988. New Jersey. 13: 488-489.

Zinsser (ed.). Diagnóstico Viral Rápido. Microbiología. 20ed. Editorial Médica Panamericana. 1994; 62: 1249-1260.

Solo sirve para suspenciones concentradas

En bacterias moviles hay que inmovilizarlas con mezcla de alcohol

Método Rápido

La muestra se distribuye en 16x25=400 celdillas

Catadores electronicos de partículas tipo Colter

Recuentos de viables en placa

Siembras pequeñas en Placas de Petri con medio slido

Cada célula viable dara origen a una colonia visible despues del tiempo adecuado de incubacion

Numero de celulas viables facil de ver

Recuento Sobre Filtros

Distincion entre celulas muertas y vivas

Suspenciones diluidas de bacterias

se pasa gran volumen de suspencion en :

Membrana de nitrocelulosa

Naylon esteril

El filtro se deposita sobre un cultivo solido

suspension microbiana

tubo cpilar

2 polos de corriente electrica

en un orificio de 30mm de diametro

una particula y se interrumpe la corriente

se recoge por un dispositivo de registro electronico

detecta el numero y tamano de las particulas

el tamano detectado es funcion de la intensidad del pulso de la particula.

libre de particulas pequeñas

erroneamente se contabilizan como bacterias chicas

pueden obstruir el orificio del aparato

Agar SPC

Agar EMB

agar McConkey

este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de facil desarrollo. aerobios, anaerobios facultativos

aislamiento de enterobacterias

medio de cultivo recomendado para el recuento de bacterias aerobicas en agua, aguas residuales, productos lacteos y otros alimentos.

serologia

deteccion de anticuerpos circuares especificos se relaciona en el suero del paciente. son utiles y practicas en la parasitosis hemotesidual y en la micosis profunda.

Parasitosis: Toxoplasmosis, toxocariosis, cisticercosis

Micosis

Histoplasmosis, aspergilosis

Coloraciones

Se observan las caracteristicas morfoloficas de los protozoarios

Se detecta su movilidad

El examen de los frotis se observa con aumento al 100x

Prueba de la catalasa

El reactivo utilizado es el peroxido de hidrogeno al 30%

se pone e el portaobjetos , se toma la bacteria a partir de una colonia aislada

Si hay burbujeo significa que hay producción de oxigeno

Prueba de la oxidasa

Sore papel de filtro

Colorantes cromogenos

Actuan como aceptadores artificiales de electrones sustituyend al oxigeno

Tetrametil -p- fenilendiamina

Dimetil -p- fenilendiamina

Es incoloro y al estar en contacto con citocromo C se pone morado si es positivo

Se agrefa2-3 gotas del reactivo de Kovacs

C ultivo

Procedimiento rutinario para la mayoria de las infecciones bacterianas y fungicas

Usada raramente para identificar helmintos y protozoos

Su éxito depende de técnicas apropiadas de recolección y y selección de un medio de cultivo adecuado