Extracción de ADN

Comenzar con el proceso de lisis y moler la muestra vegetal con ayuda de un mortero y agua

Extracción de ADN

Adicionar detergente para la separación de la membrana celular con las moléculas de detergente

Utilizar cloroformo para eliminar la proteínas del ADN distribuidas en la solución

Añadir sales para la precipitación del ADN mediante la interrupción de enlaces de hidrógeno

Mediante la centrifugación, sedimentar el ADN y eliminar el sobrenadante

Sí

No

Lavar el ADN en una solución de etanol al 70% para eliminar las sales e impurezas

¿Cumple con los estándares?

Precipitar el ADN de la proteína con el uso de etanol o isopropanol

Resuspender el ADN en un búffer para garantizar la estabilidad y el almacenamiento a largo plazo.

La cantidad de ADN se determina por espectrofotometría a una absorbancia de 260 nm y la calidad es determinada utilizando el cociente de la relación de las lecturas de la absorbancia de A 260 nm/A 280 nm, considerando como ADN de calidad un coeficiente de entre 1.8 a 2.

Comprobar la calidad, cantidad e integridad del ADN

Volver a lavar el ADN o hacer la extracción desde el principio

Proceder con la práctica de PCR

Desneutralizar el ADN, separando las cadenas con una temperatura de 95°

Disminuir la temperatura para que se genere una hibridación con el primer

La temperatura y el tiempo puede variar de acuerdo con la optimización del protocolo.

La polimerasa toma el ADN molde para sintetizar la cadena complementaria y utilizando el primer como soporte inicial necesario para la síntesis de la nueva cadena.

¿Se logró satisfactoriamente

la PCR?

Llorar, comprobar el material y comenzar la práctica de nuevo

Proceder con la práctica de electroforesis

Preparar el buffer a utilizar, con un Stock que se utilizara para diluir, este Stock puede ser 10x o 50x.

Preparar el gel a utilizar mediante el buffer y la agarosa en la concentración y volúmenes deseados

Preparar las muestras con componentes que permitan obtener una densidad mayor a la del buffer

Añadir las muestras obtenidas al gel

Agregar las muestras a unos pocillos con ayuda de las micropipetas

Colocar el gel en el transiluminador y visualizar las muestras con una solución intercalaste

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