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Elaboración de moldes

Inicio

Diseñar geometría auxética

Imprimir negativo en 3D con PLA

Calentar TP du4eza 20 a 180 °C en mufla

Colocar el negativo sobre el termoplástico

Enfriar y desmoldar

Preparación del gel

•Agregar 3 mL de agua y 0.6 g de almidón

Agitar hasta incorporar

Calentar 2 horas a 170°C hasta obtener un gel.

Agregar 0.06 g grenetina y 0.198 g de nitrato de sodio

Formación del bioparche

Verter el gel en el molde, distribuir uniformente y dejar secar por 2 días en un desecador

Desmoldar el parche

Reticulación con ácido cítrico

Caracterización fisicoquímica

Microscopía Electrónica de Barrido (SEM

Espectroscopía FTIR

Tomar muestras de:

Almidón puro.

Almidón + grenetina.

Parche reticulado.

Registrar espectros FTIR.

Identificar grupos funcionales y cambios estructurales.

Colocar muestra del parche en el microscopio SEM.

Preparar una solución agregando 0.9 g de ácido cítrico en 3 mL de agua

Sumergir el parche 3 horas retirar y secar

Analizar: morfología, homogeneidad y microestructura.

Ángulo de contacto

Cortar muestras de 1 cm².

Colocar sobre platina del goniómetro.

y depositar 1 gota de agua desionizada.

Capturar imagen lateral y medir el ángulo de contacto.

Capacidad de absorción de agua

Pesar parches secos

Sumergir en PBS pH 7,4 a 37 °C durante:

24 h, 48 h, 72 h, 7 días y 15 días.

Sacar, secar superficialmente y pesar

Biodegradación

Pesar parches secos

Colocar en frascos con 5 mL de PBS pH 7,4.

Incubar a 37 °C durante: 24 h, 48 h, 72 h, 7 días y 15 días

Medir el peso final

Tasa de transmisión de vapor de agua (WVTR)

Cortar muestras de 1 cm².

Colocar sobre frasco con 10 mL de agua destilada sin tocar el líquido.

Incubar 24 h a 30 °C.

Medir el peso inicial

Preparación del cultivo bacteriano (Staphylococcus epidermidis 12228)

Seleccionar colonia de LB agar donde previamente ya esta inoculada

Inocular en caldo LB.

e incubar 37 °C con agitación overnight.

Ensayo de inhibición de bioparche (método drop‑plate)

Fin de la parte de la obtencion del Bioparche

Inicio de pruebas de caracterizacion

En tubos eppendorf:

Colocar 900 µL de caldo LB + 100 µL de overnight.

Añadir 3 réplicas de parches de 5 mm (almidón, almidón/grenetina, reticulado).

Realizar diluciones seriadas 10⁻¹ a 10⁻⁸ (900 µL agua + 100 µL muestra).

Aplicar 2 µL por triplicado en placa dividida (LBA) por dropping.

Dejar secar en campana de flujo laminar e incubar 24 h a 37 °C en placa invertida.

Control en placa de contacto (alternativo / complementario)

Tomar los mismos tubos eppendorf con parches incadas.

Colocar el parche en el centro de una placa de LBA.

Incubar 24 h a 37 °C.

Observar el crecimiento bacteriano o inhibición.

Tinción de Gram

Colocar 1 gota de muestra bacteriana en portaobjetos y extender finamente y secar.

Fijar al fuego (flama).

Aplicar violeta de genciana (1 min), sin enjuagar, añadir solución de yodo (1 min).

Enjuagar ligeramente con agua.

Decolorar con alcohol (15 s).

Enjuagar de nuevo y añadir safranina (1 min)

Enjuagar, secar al aire y observar al microscopio con objetivo 100× (aceite).