Detectores de HPLC

Detectores de HPLC

1. Detectores UV- visible

   • Absorbidos en la region UV de 190-600 nm. Proporcionan una buena sensibilidad para que compuestos que absorbe la luz a nivel ~ pg
   • Detectores de absorbancia. Durante el análisis, la muestra pasa a través de una celda de vidrio claro sin color, llamada celda de flujo. Cuando la luz UV se irradia en la celda de flujo, la muestra absorbe una parte de la luz UV. Así, la intensidad de la luz UV observada para la fase móvil (sin muestra) y la muestra que contiene eluyente será diferente. Mediante la medición de esta diferencia, la cantidad de muestra se puede determinar. Puesto que la absorbancia de UV también difiere dependerá de qué longitud de onda se utiliza, es importante elegir una longitud de onda apropiada en función del tipo de analito
   • es eficaz en la detección de componentes colorantes tales como tintes y manchas debido a la cobertura de la región de luz visible. Los detectores de UV no pueden utilizarse para probar sustancias bajas en cromóforos (incoloros o prácticamente incoloros) ya que no pueden absorber luz en rangos bajos.

2. Detectores fluorescentes

   • mide la emisión óptica de la luz por moléculas de soluto después de que han sido excitada a una longitud de onda de energía más alto
   • La mayoría de los productos farmacéuticos, productos naturales, muestras clínicas, y los productos derivados del petróleo tienen absorbancia fluorescente.
   • Detectores FL puede ser tanto como 100 veces más sensible que un UVdetector, haciéndolos particularmente útiles para situaciones de muestras limitada o baja concentración de la muestra

3. Detectores electroquimicos

   • Para los compuestos que pueden ser oxidados o reducidos, es uno de los detectores de HPLC más sensibles y selectivos disponibles
   • Se aplica una diferencia de potencial fijo entre el electrodo de trabajo y el electrodo de referencia para conducir una reacción electroquímica en la superficie del electrodo de trabajo. Actual producido a partir de la reacción electroquímica como compuestos se oxidan o se reducen en el electrodo de trabajo está equilibrada por una corriente que fluye en la dirección opuesta en el electrodo contador. La salida de la respuesta del detector CE es la corriente amplificada resultante de la reacción electroquímica en el electrodo de trabajo.
   • fenoles, aminas, peróxidos y mercaptanos pueden detectarse por oxidación, mientras que hidrocarburos no saturados, cetonas, aldehidos y nitrocompuestos aromáticos pueden ponerse de manifiesto mediante procesos de reducción

4. Detectores radioactivos

   • El detector de radioactividad puede ser muy sensible y es extremadamente útil para la detección de compuestos radiomarcados en estudios toxicológicos, de metabolismo o de degradación
   • La mayoría de los detectores de radiactividad se basan en la tecnología de centelleo líquido para detectar fósforos causados por los nucleidos radiactivos, como el bajo consumo de energía b-emisores (por ejemplo, 35S, 14C.3H, y 32P) o más fuertes,a- b-, y c-emisores

5. Detección conductiva

   • Los detectores de conductividad son los más utilizados cuando los solutos eluidos son iónicos, como, por ejemplo, ácidos y bases, así como cationes y aniones inorgánicos
   • se lleva a cabo normalmente aplicando un potencial eléctrico entre dos electrodos, lo cual origina un movimiento de los aniones y cationes presentes en el seno de la disolución. La resistencia (o la conductividad) de la disolución contenida entre los dos electrodos depende de la naturaleza y concentración de las especies iónicas presentes
   • pueden tener una sensibilidad elevada y responden proporcionalmente a los cambios de concentración de especies iónicas

6. Detectores de índice de refracción

   • mide la diferencia de índice de refracción óptica entre la fase móvil y la muestra; no se requiere un cromóforo en la molécula de soluto
   • Por esta razón, la detección de RI se ha usado con mucho éxito para el análisis de azúcares, triglicéridos, y ácidos orgánicos
   • Sin embargo, son muy sensibles a los cambios de temperatura, y se han de mantener a una temperatura constante en unas pocas milésimas de grado centígrado. Por otra parte, no son tan sensibles como la mayoría de los otros detectores, y por lo general no se pueden utilizar en la elución con gradiente.

7. Detector de dispersión de luz

   • el efluente de la columna se pasa a un nebulizador donde se convierte en una fina niebla mediante un flujo de nitrógeno o aire. Las finas gotitas se llevan a través de un tubo de conducción a temperatura controlada donde tiene lugar la evaporación de la fase móvil, lo que origina unas finas partículas de analito. La nube de partículas de analito pasa a través de un haz láser. Mediante un fotod
   • es notablemente más sensible que el detector de índice de refracción.
   • es particularmente útil en la cromatografía de exclusión por tamaño para la determinación de los pesos moleculares de polímeros o moléculas biológicas.