Tinción Gram

Tinción Gram

1. La tinción o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias.

   • Es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas.
     • Fue desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram.
       • Gram viajó por Europa para perfeccionar sus conocimientos de Farmacología y Bacteriología.
         • Gram experimentó con coloración de las bacterias. En 1884, estableció la diferencia entre las bacterias ‘Klebsiella Pneumoniae’ y ‘Neumococo’, causantes de neumonía.
           • Realizó un proceso de coloración de las bacterias que consistió en añadir violeta de genciana, yodo, yoduro de potasio y lavado con etanol.
             • Observó que algunas bacterias se teñían de morado, y las denominó Bacterias Gram positivas. Más tarde denominaría Gram negativas a las que no se teñían de color.
   • Prueba que busca bacterias en una parte del cuerpo donde se sospecha una infección o ciertos fluidos corporales, como la sangre u orina.
     • Es definida como una tinción diferencial debido a que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
       • Los elementos celulares presentan un color rosado o rojizo y las bacterias se tiñen de color azul oscuro (grampositivas) o rojo (gramnegativas).
         • La diferencia entre éstas se debe a la naturaleza física de sus paredes celulares.
           • La pared celular de las Gram positivas está constituida por peptidoglicano, y la superficie externa de proteínas.
           • La pared de las Gram negativas comprende tres estructuras: la membrana plasmática, espacio periplásmico que incluye peptigolicano y membrana externa.
   • MORFOLOGÍA BACTERIANA
     • Características y sus estructuras que tiene cada bacteria.
       • Son microorganismos unicelulares que se reproducen por fisión binaria (división simple). Contienen información genética, sistemas de producción de energía y sistemas biosintéticos necesarios para el crecimiento y reproducción.
         • La división de los seres vivos se realiza según el tipo de célula: eucariota y procariota.
           • Cuenta con las siguientes estructuras: Material genético ADN, célula eucariota que posee siempre membrana nuclear; ribosomas, citoplasma y membrana.
             • Las bacterias esféricas se denominarán cocos, las alargadas serán bacilos, las curvas y espirales serán los espirilos, espiroquetas, comas o vibriones.
               • Se visualizan con microscopio óptico o electrónico.
                 • Cocos
                   • Agrupaciones homogéneas y de forma casi esférica. Pueden ser: Diplococos, Tétradas, Sarcinas, Estreptococos
                 • Bacilos
                   • Agrupaciones heterogéneas, pueden ser cilíndricos en forma de bastón, largos y delgados, pequeños, gruesos, rectos, afilados o redondeados; Diplobacilos, Estreptobacilos, Empalizado,
                 • Espirilos
                   • Su forma presenta una o más curvaturas, algunas forma de hélices; Vibriones, Espirilos, Espiroquetas
   • PROCEDIMIENTO
     • Primero, tener un microrganismo sembrado para realizar la tinción.
       • 1.- Recoger la muestra de bacterias mediante un isopo (bastón estéril de algodón). Extender la muestra sobre un portaobjetos y dejarla secar.
         • 2.- Fijar la muestra mediante un alcohol (metanol).
           • 3.- Aplicar el tinte de violeta de genciana sobre el portaobjetos y esperar un minuto.
             • 4.- Enjuagar la muestra con agua y aplicar un fijador del violeta de genciana (lugol). El lugol y el violeta de genciana forman un complejo insoluble en agua capaz de penetrar en la pared de las células bacterianas.
               • 5.- Lavar de nuevo el portaobjetos con una mezcla de alcohol y acetona durante unos segundos.
                 • PREPARACIÓN DEL MICROSCOPIO
                   • 1.- Abrir pinzas
                     • 2.- Colocar porta objetos
                       • 3.- Colocar 10x aumento; 40 x aumento ajustar con el micrométrico
                         • 4.- Abrir pinzas y retirar el portaobjetos
                           • 5.- Colocar aceite de inmersión
                             • 6.- Mover el revólver y nuevamente colocar el portaobjetos
                 • Se puede añadir una tinción de safranina o fucsina para distinguir las gram negativas que aparecerán con un tono rosado o rojo. Así será posible observar la muestra al microscopio de color violeta las gram positivas y de color rosa-rojizo las gram negativas.