Microscopio

Microscopio

1. La microbiología se ocupa generalmente de organismos tan pequeños que el ojo humano no los puede ver a simple vista, debido a la naturaleza de esta disciplina, el microscopio tiene una importancia crucial

   • Hay 2 tipos fundamentales de microscopios:
     • Óptico
     • Electrónico

2. Un microscopio convencional está formado por un cuerpo o soporte de metal compacto compuesto por una base y un brazo donde se fija el resto de las partes, en la base se sitúa la fuente de luz cuya intensidad es regulada.

   • En todos los microscopios el de mayor aumento es el de inmersión, llamado así porque sobre el portaobjetos se deposita una gota de aceite de cedro, en la que se sumerge el objetivo, el resto de los objetivos se denominan secos, ya que se utilizan al aire.

3. Pautas para observación de preparaciones

   • 1.Encender el microscopio y colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas, con la ayuda de los tornillos desplazar la preparación hasta que la extensión se sitúen en el centro de la luz concentrada por el condensador.
     • 2. Como el microscopio es binocular, ajustar la distancia entre ambos oculares de manera que la visión sea cómoda, utilizando ambos ojos. Para compensar las diferencias ópticas del ojo izquierdo y el derecho, girar los oculares hasta que la imagen sea más clara. Se aconseja a aquellas personas que llevan gafas se acostumbren a prescindir de ellas para enfocar las preparaciones.
       • 3. Si se va a observar una preparación teñida, comprobar que el condensador está elevado y el diafragma abierto, si se va a observar una preparación en fresco o muestras sin teñir, el condensador debe estar bajo y el diafragma semi cerrado.
         • 4. Cuando se utiliza el objetivo de inversión se deposita previamente una gota de aceite de cedro sobre la preparación.
           • 5. Mirando el microscopio de frente, subir la platina hasta que el objetivo seco o de inmersión tomen contacto con la preparación, hay que ser extremadamente cuidadoso al realizar esta operación, ya que se puede romper el portaobjetos y dañar la lente del objetivo.
             • 6. Enfocar la preparación bajando lentamente la platina, nunca enfocar subiendo la platina, utilizar el micrométrico para el ajuste, grosero, rápido y llevar la preparación al enfoque final con el micrométrico, el micrométrico debe emplearse únicamente para conseguir nitidez una vez enfocada a la preparación con el macrométrico.
               • 7. Una vez finalizada la observación, debe separar el objetivo de la preparación y retirarla cuidadosamente, si no se van a guardar, depositar todos los portaobjetos en el contenedor destinado al material de vidrio.
                 • 8. Desconectar el microscopio, limpiar el objetivo de inmersión y todas las zonas que hayan quedado manchadas con aceite de inmersión, utilizando un papel suave impregnado en solución desengrasante y cubrir el microscopio con su funda.

4. El microscopio óptico de campo claro permite examinar los microorganismos sin teñir normalmente vivos, las denominadas preparaciones en fresco, en las que se reduce la luminosidad del campo de visión para aumentar el contraste.

   • 1. Se deben emplear cultivos jóvenes, en fase exponencial de crecimiento.
     • 2. Si el cultivo es líquido, se deposita una gota sobre el portaobjetos, si se parte de un cultivo sólido el inóculo se re suspende cuidadosamente en una gota de agua, no se debe agitar vigorosamente los cultivos, ni hacer extensiones, pues la células pueden perder sus flagelos.
       • 3. Sobre la preparación se deposita un cubreobjetos, apoyando a un lado del mismo sobre el portaobjetos inclinándolo hacia la reparación, hasta dejarlo caer suavemente sobre la muestra sin compresión.
         • 4. Al tratarse de una preparación sin teñir, hay poco contraste entre las células y el medio, y un exceso de luz la hace aún más difícil, por lo que para hacer menos ardua la observación, el condensador debe situarse en posición baja con el diafragma semicerrado.
           • 5. Las preparaciones en fresco, se observan preferiblemente con el objetivo de 40 aumentos, pero para facilitar el enfoque, es recomendable empezar con el objetivo de 4 aumentos, pasar después al objetivo de 10 aumento y por último al de 40 aumentos
             • 6. Es importante aprender a distinguir el movimiento debido a flagelos, caótico e irregular del movimiento debido a las corrientes, todas las células se desplazan en la misma dirección y del movimiento browniano que toda partícula de pequeño tamaño presenta cuando se encuentra en suspensión, movimiento vibratorio e irregular alrededor de un punto.
               • 7. Al concluir, depositar la preparación en los contenedores destinados al material de vidrio.
   • Este tipo de preparaciones se utilizan para la observación de la movilidad bacteriana, así como para la observación de la morfología de otros microorganismos de mayor tamaño tales como levaduras, mohos, protozoos o algas microscópicas.

5. Bibliografía

   • 1. Facultad de Farmacia. Universidad de Sevilla. Técnicas Básicas en el Laboratorio de Microbiología. Microscopio óptico [Internet]. 2010. Disponible en: https://youtu.be/0Tunrrm3OlM

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