INMUNOANÁLISIS

INMUNOANÁLISIS

1. Conceptos relacionados

   • Anticuerpo (AC)
     • Es una molecula bi-funcional que se une a los antigenos y ayudar a combatir infecciones y protegerlo
   • Antígeno (AG)
     • sustancia que puede ser reconocida por los receptores del sistema inmunitario adaptativo
   • Reacción inmunológica
     • Es aquella en la cual un antígeno es reconocido por su respectivo Anticuerpo. En esta se presenta una avidez y especificidad, determinadas por fuerzas de atracción y condicionadas por las concentraciones de ambas moléculas de dicha reacción

2. Cinética de las reacciones AC-AG

3. Tipos de reacciones

   • Interacción primaria
     • interacción química específica entre los anticuerpos producidos por las células B de los glóbulos blancos y los antígenos durante la reacción inmune.
   • Interacción secundaria
     • Precipitaciones, floculación, aglutinación, fijación del complemento
   • Interacción tercearia
     • Son las que tienen lugar en interacciones biológicas, por ejemplo, la activación del sistema del complemento, la opsonización, fagocitosis, entre otras

4. Principios generales del Inmunoanálisis

   • Los inmunoanálisis son técnicas empleadas para detectar y cuantificar los Antígeno y los Antícuerpos.

5. Clasificación de métodos de inmunoanálisis

   • Inmunoanálisis de partículas
     • Se emplean en partículas como eritrocitos, armazones de látex y de poliglicilmetacriato, sales de oro y sales de colorante en dispersión, como marcadores para el antígeno y el antícuerpo.
     • Pruebas de aglutinación de particulas
       • La aglutinación es una reacción serológica clásica que comprende la aglomeración de una suspensión celular mediante un anticuerpo específico
         • Aglutinación indirecta o pasiva
           • Las células o partículas inertes son portadores pasivos y los antígenos pueden ser absorbidos físicamente o acoplados covalentemente a la superficie.
         • Aglutinación directa
           • Es una reacción clásica que comporta la aglomeración de células o de una suspensión de partículas insolubles, como bacterias, hongos u otros organismos, mediante anticuerpos específicos. La agregación se produce por anticuerpos que poseen dos o más receptores de conjugación para fijar las células o partículas
         • Prueba de Antiglobulina (prueba de Coombs)
           • Los Anticuerpos incompletos como la IgG anti- Rhᵒ no producen aglutinación en una suspensión salina de eritrocitos homólogos
   • Enzimoinmunoanálisis (EIA)
     • Se emplea una enzima como marcador para la detección de Antígenos o Antícuerpos
       • Heterogéneo: La reacción ag-ac no modifica la actividad del marcador enzimático
         • ELISA: La actividad enzimática en la fracción unida y la libre se cuantifica por la conversión de un producto catalizado por la enzima
           • ELISA competitivo
             • Con empleo de antigeno marcado por una enzima
             • Mediante conjugados de enzima-antícuerpo
           • ELISA no competitivo
             • Tipo "Sandwich": El anticuerpo inmovilizado en fase sólida se incuba con el antígeno estandar o de prueba
       • Homogéneo: Modula la actividad de la enzima
         • Análisis con Antígeno: la sustancia para analizar se marca por unión covalente con la enzima y el anticuerpo frente al analizado determina la actividad de la enzima
         • Análisis con sustrato: se marca por enlace covalente el sustrato enzimático con un producto a analizar, de forma que la union del sustrato y anticuerpo inhiba estéricamente la enzima, impidiendole actuar sobre el sustrato
         • Análisis con co-factor: unión covalente de un antígeno o producto a analizar con un cofactor enzimático y se vita que el anticuerpo se combine con la apoenzima adecuada.
     • ELISA
       • Análisis de Inmunoabsorción Enzimática
     • EMIT
       • Técnica de Inmunoanálisis con Multiplicación Enzimática
   • Inmunoanálisis por fluorescencia (FIA)
     • Cuando una molécula de esta clase se irradia con luz de longitud de onda adecuada, quedan exitados los electrones dentro de la molecula y cambian hacia un estado de mayor energía
       • Heterogéneos
         • FIA en fase solida
           • - Método indirecto - Método competitivo - Método sandwich - Método fluoroinmunométrico
         • FIA por concentración de particulas
           • Análisis inmunofluorométrico
       • Homogéneos
         • Aumento o disminución de la fluorescencia de los haptenos por el anticuerpo
         • FIA con sustrato marcado
   • Radioinmunoanálisis (RIA)
     • RIA competitivo
       • Sigue las leyes de acción de masas, que especifica las relaciones entre la sustancia problema y las proteínas de unión, el anticuerpo o el receptor.
     • RIA no competitivo
       • Conocido como análisis inmunoradiométricos (IRMA) o tipo sándwich y aquí se emplea un exceso de anticuerpo.

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