Precipitación por ligandos de afinidad o inteligentes

Precipitación por ligandos de afinidad o inteligentes

1. Se logra la precipitación de proteínas mediante el uso de ligandos que se unen a la proteína de interés. e utiliza para aislar y purificar biomoléculas

   • Ligando homobifuncional
     • 2 ligandos idénticos unidos por un brazo espaciador:se forma una estructura entrecruzada, la cual, cuando es lo suficientemente grande, precipita.
     • Condiciones
       • -La proteína de interés debe tener más de un sitio de unión -El ligando debe tener una fuerte afinidad por la proteína El espacio que conecta a los dos ligandos debe ser lo suficientemente largo Proporción ligando:proteína equivalente
   • Ligando heterobifuncional
     • Unión de un ligando a un polímero stos polímeros son hidrofílicos y solubles en agua, pero cambian reversiblemente a hidrofóbicos e insolubles cuando se alcanzan condiciones críticas.
     • Condiciones
       • -Contener grupos reactivos - No interactuar fuertemente con el ligando o impurezas, -Dar una separación completa de fases del polímero -Formar precipitados compactos, fáciles de separar y excluir impurezas -Ser solubilizado fácilmente. -Ser accesible y barato
   • Equipo y Material
   • Parámetros experimentales
     • -Concentración de proteína -Concentración de ligandos (y polímeros) -Temperatura -pH y fuerza iónica -Concentración de metales
       • Rangos:
   • Tipos de moléculas
     • Proteínas, enzimas y anticuerpos
   • Ejemplos
     • 1) Purificación de tripsina, utilizando p-Aminobezamidina como ligando y poliacrilamida como polímero
       • 2) Purificación de proteína A utilizando IgG humana como ligando y hidroxipropilmetilcelulosa como polímero.
   • Ventajas
     • -Aumenta la selectividad -Equipamiento simple y posible escalamiento -Costos accesibles y manejo sencillo. Máximo grado de reducción de volumen durante el proceso
   • Desventajas
     • Ligandos homobifuncionales: Conocer la concentración aproximada de la molécula objetivo. Dificultades para redisolver el precipitado y recuperar la molécula objetivo, consume tiempo, y solo se pueden utilizar ligandos y productos que tengan por lo menos 2 sitios de unión
     • Lgandos heterobifuncionales: el polímero utilzado puede atraer proteínas contaminantes de unión no específica, disminuyendo el nivel de purificación