CITOMETRIA DE FLUJO

CITOMETRIA DE FLUJO

1. DEFINICION: ANALISIS DE CARACTERISTICAS DE LAS CELULAS QUE PASAN UNA A UNA EN UNA SUSPENSION LIQUIDA Y QUE SON ESTIMULADAS A TRAVES DE UN RAYO DE LUZ DE LASER

   • CARACTERISTICAS FISICAS
     • GRANULACION DEL CITOPLASMA
     • COMPLEJIDAD DEL CITOPLASMA
     • TAMAÑO CELULAR
   • CARACTERISTICAS ANTIGENICAS
     • ENTIFICACION DE LINEAS CELULARES POR FLUORESCENCIA
   • FUNDAMENTO
     • LECTURA
       • LUZ ESPARCIDA
         • INTENSIDAD DE FLUORESCENCIA
     • MEDICION
       • CONJUNTO DE FOTODIODOS
     • DATOS
       • RECOLECCION Y TRANSMISION AL COMPUTADOR
         • PROCESAMIENTO DE DATOS
           • RESULTADO FINAL

2. COMPONENTES

   • SISTEMA LIQUIDO
     • MOVIMIENTO DE LA MUESTRA A TRAVES DE LA CAMARA DE FLUJO
     • LAS CELULAS PASAN A TRAVES DEL HAZ DE LUZ LASER EN UNA FILA UNICA
     • PASAN 5000 CEULAS/SEGUNDO
     • SE PRODUCE UN FLUJO LAMINAR QUE ORDENA LAS CELULAS INDIVIDUALMENTE
   • SISTEMA OPTICO
     • LASER DE ARGON 88 nm
     • TUBO HUEVO Y CERRADO QUE CONTIENE UN GAS INERTE
     • CORRIENTE ELECTRICA
     • LUZ LASER INTENSA Y MONOCROMATICA
     • EXITA LAS PARTICULAS GASEOSAS INERTES (AUMENTA SU ENTROPIA)
     • VUELVE A SU ESTADO NATURAL DE ENTROPIA BAJA
     • SE LIBERA UN FOTON DE LUZ
     • CONJUNTO DE ESPEJOS CONVERGE E INTENSIFICA LA LUZ
     • AL PASAR LAS CELULAS A TRAVES DEL LASER, LA LUZ SE DISPERSA, Y SE ESPARCE EN ANGULOS DIFERENTES
       • LECTURA EN FSC
         • ES LA DISPERSION FRONTAL
           • ANGULOS < 10°
           • DEFINE EL TAMAÑO DE LA CELULA
       • LECTURA SSC
         • CORRESPONDE A LA LECTURA LATERAL
           • ANGULO >10° Y < 90°
           • DETERMINA LA GRANULARIDAD O ESTRUCTURA NUCLEAR
       • LA INTENSIDAD DE LA FLUORESCENCIA ES PROPORCIONAL A LA CANTIDAD DE FLUOROCROMO PRESENTE SOBRE LA CELULA O DENTRO DE ELLA
   • SISTEMA DE DETECCION DE SEÑALES
     • CONJUNTO DE FILTROS DE INTERFERENCIA O ESPEJOS DICROICOS, O DE AMBOS Q DIRIGEN
       • DIRIGEN LA LUZ A LOS FOTODIODOS
         • DIRIGEN LA LUZ LOS TUBOS FOTOMULTIPLICADORES
           • LOS FOTOMULPLICADORES SON UTILES EN LA CONECCION Y AMPLIFICACION DE LA LUZDISPERSAS Y DE LAS EMISIONES FLUORESCENTES MAS DEBILES
           • GENERADOR DE PULSO DE VOLTAJE
             • SISTEMA DE DATOS
         • LOS FOTODIODOS CAMBIAN LOS FOTONES DE LUZ EN SEÑALES ELECTRONICAS
   • SISTEMA DE MANEJO DE DATOS

3. PREPARACION DE LA MUESTRA Y TRATAMIENTO

   • MUESTRA
     • SANGRE VENOSA CON EDTA
       • MARCAJE
       • AGENTE LISANTE DE G.R
     • M.O CON EDTA
       • LAVAR LA MUESTRA CON SOLUCION SALINA ISOTONICA
       • FILTRACION DE 50 MICRAS
     • PARA DETECTAR Ag DE SUPERFICIE
       • MARCAR LAS CELULAS CON Ac MONOCLONALES CONJUGADOS CON FLUOROCROMOS
       • LISAR LOS ERITROCITOS
       • FIJAR LAS CELULAS
     • PARA DETECTAR Ag CITOPLASMATICO
       • FIJAR LAS CELULAS
       • PERMEABILIZARLAS
       • MARCARLAS
     • PARA DETECTAR SIMULTANEAMENTE Ag DE MEMBRANA Y Ag CITOPLASMATICO
       • MARCAR Ag DE MEMBRANA
       • LISAR LOS G.R
       • FIJAR Y PERMEABILIZAR LAS CELULAS
       • MARCAR EL Ag CITOPLASMATICO

4. APLICACIONDE DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

   • INMUNOFENOTIPIFICACION
     • TECNICA PARA IDENTIFICAR CELULAS SEGUN LOD TIPOS DE Ag O MARACDORES QUE PRESENTEN
       • EXPRESION DE MARCADORES DURANTE LA ONTOGENIA NORMAL DE CELULAS B
       • EXPRESION DE MARCADORES DURANTE LA ONTOGENIA NORMAL DE CELULAS T
     • SE USA PARA EL DIAGNOSTICO DE TIPOS ESPECIFICOS Y DE LEUCEMIAS Y LINFOMAS
       • LEUCEMIAS AGUDAS
         • SE USA UN AMPLIO PANEL DE Ac MONOCLONALES, DIRIGIDOS CONTRA Ag MIELOIDES LINFOIDES U OTROS CITOPLASMATICOS O NUCLEARES PARA DISTINGUIR
           • LEUCEMIAS MIELOIDES
             • LMA
               • DEBE EXPRESARSE 2 O + MARCADORES MIELODES
                 • CD13, CD33, CD117 Y ANTI-MPO
                 • NO SE PUEDE DISTINGUIR ENTRE LOS SUBTIPOS DE LMA SEGUN CLASIFICACION FAB
           • LEUCEMIAS LINFOIDES
             • LLA
               • LINAJE B
                 • MARCADORES DE 1° Y 2° LINEA
                 • LLA DE PRECURSORES TEMPRANOS
                 • LLA DE CELULAS PRE B
                 • LLA DE CELULAS B TRANSICIONAL
                 • LLA DE CELULAS B MADURAS
               • LINAJE T
                 • MARCADORES DE 1° Y 2° LINEA
                 • LLA PRO T
                 • LLA PRE T
                 • LLA T CORTICAL
                 • LLA T MADURO
       • LEUCEMIA LINFOIDE CRONICA
         • DE LINFOCITOS PEQUEÑOS
           • EXPRESAN Ag PAN-B COMO Ig DE SUPERFICIE
           • SISTEMA DE PUNTUACION EN BASE A 5 TIPOS DE MARCADORES, VALORANDO SU PRESENCIA O AUSENCIA E INTENSIDAD DE EXPRESION
             • INDICO QUE LA LLC-B TIENE PUNTUACIONES ENTRE 3 Y 5 EN COMPARACION CON OTROS SLPC QUE TIENEN PUNTUACION BAJO 3
   • ANALISIS DE PLOIDIA DEL DNA
     • IDENTIFICA: CELULAS TUMORALES, CONTENIDO DE DNA DE LAS CELULAS, CUANTIFICA LA CANTIDAD DE DNA, PUEDE IDENTIFICAR LA PRESENCIA DE ANEUPLOIDIA (INDICADOR DE NEOPLASIAS
     • DETERMINA LA MALIGNIDAD, Y VIGILA LA EFICACIA DEL TRATAMIENTO
   • CONTEO DE RETICULOCITOS
     • EVALUA LA ACTIVIDAD ERITROYETICA
       • SE USA UN COLORANTE FLUORESCENTE PARA TEÑIR EL RNA RESIDUAL
     • ANALIZA 10.000 CELULAS PARA VER EL % DE RETICULOCITOS
   • ESTUDIO DEL VIH
     • CUANTIFICA LINFOCITOS CD4+ Y CD8+
   • ESTUDIO DE PLAQUETAS
     • MIDE LA ESTRUCTURA ANTIGENICA DE LAS PLAQUETAS (Ej: GLICOPROTEINAS DE SUPERFICIE)
     • PUEDE MEDIR LA REACTIVIDAD PLAQUETARIA, FUNCION HEMOSTATICA, GRADO DE MADURACION DE ACUERDO A DIFERENTES FUNCIONES DE LA PLAQUETAS
     • DISFUNCION PLAQUETARIA HEREDITARIA
       • A PARTIR DE SANGRE TOTAL O PLASMA RICO EN PLAQUETAS c7 EDTA
         • TROMBASTENIA DE GLAZMMAN (IIB/IIA)
           • PARA VER GRAVEDAD Y HETEROGOCIDAD DE PLAQUETAS CON EL DEFECTO EN LA FAMILIA O POBLACION
         • SINDROME DE BERNARD SOULIER (IB/IX/V)
     • TROMBOCITOPATIAS INMUNES
       • CUANTIFICAR Y EVALUAR LAS Ig UNIDAS A LAS PLAQUETAS
         • DETECTA Ac YA UNIDOS A LAS PLAQUETAS
         • DETECCION DE Ac EN SUERO USANDO PLAQUETAS PROBLEMAS

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