Métodos y Técnicas utilizadas en el estudio de la Célula

Métodos y Técnicas utilizadas en el estudio de la Célula

1. Estudio Fisicoquímico

   • aislamiento, localización e identificación de componentes de la celula
     • CENTRIFUGACIÓN
       • Separación de mezcla sometiéndola a elevadas aceleraciones
     • CROMATOGRAFÍA
       • Separación de mezcla por sus diferencias de absorción
       • se basa en las fuerzas de Van der Wals
     • CULTIVOS "IN VITRO"
       • mantienen líneas celulares en el exterior de un organismo
     • ELECTROFORESIS
       • las sustancias se desplazan en función de su carga eléctrica
     • FLUORESCENCIA
       • Emite radiaciones uv que atraviesan la molécula
       • Se usa con moléculas fluorescentes naturales
     • FRACCIONAMIENTO CELULAR
       • obtiene fracciones puras de un componente celular
       • Proceso
         • Rotura de células o tejido
         • Separación de la fracción por centrifugación
     • CITOQUÍMICA
       • estudia la composición química de la célula
       • detecta localización topográfica de:
         • principios inmediatos
         • enzimas
         • metales pesados
         • otras sustancias
       • mediante reacciones coloreadas, enzimáticas o de inmunofluorescencia,se investiga:
         • composición bioquímica de estructuras celulares
         • localización
         • funcionamiento
     • RADIOISÓTOPOS
       • Consiste en marcar la molécula cuyo destino interesa seguir
       • Proceso
         • unir un isótopo radiactivo
         • cultivar las células
         • detectar la radiación a intervalos
       • más usados en Biología celular
         • 14C, 32p, 2H, 3H, 35S, 24Na

2. Estudio Morfológico

   • Observación directa de la estructura celular
     • MICROSCOPIA
       • óptica
         • Utiliza luz visible y lentes ópticas para aumentar la imágen.
       • Electrónica
         • utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible
         • De Transmisión (TEM)
           • se usa para observar estructura de virus y ultraestructura celular
         • De Barrido (SEM)
           • sustituye la luz por un haz de electrones y las lentes por electroimanes
     • CONTRASTE DE FASES
       • Usa el índice de refracción de la célula para crear una imagen de mayor contraste
     • CAMPO OSCURO
       • Dirige la luz a la preparación haciendo que la luz difractada pase al ocular.
       • La muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro.
     • BARRIDO CONFOCAL
       • Emplea iluminación con rayo láser
       • Toma imágenes en cortes muy finos

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