CLAE

CLAE

1. Princípios básicos

   • Migração Diferencial dos componentes
   • Diferentes interações entre FM e FE

2. Fase móvel

   • Deve ser líquida ou líquido supercrítico
   • tipos de eluição
     • Gradiente
       • há variação na composição e concentração da fase móvel durante a corrida
     • Isocrático
       • Não há variação na composição e concentração da fase móvel durante a corrida
   • Precisa ser filtrada e desgaseificado
     • A filtração evita o entupimento e a retirada de ar evita bolhas de ar que podem aumentar a pressão, prejudicando o desempenho e provocando pulsos no sinal do detector
   • Parâmetro de escolha da FM
     • Viscosidade
       • Viscosidade acarreta na dificuldade de bombeamento e eleva a Pressão
       • Afeta a difusão dos componentes do analito
     • PRrssão de vapor
     • Toxidez
     • Índice de refração
     • Corte de UV
       • é o comprimento de onda abaixo do qual o solvente absorve mais que uma unidade de absorbância em uma cela de 1 cm de caminho óptico.
     • Miscibilidade dos solventes
       • Sistemas não miscíveis afetam o desempenho da bomba, da coluna e induzi ruídos no detector e altera o tempo de retenção e prejudica analises quantitativas
     • Força dos solventes

3. Fase estacionária

   • Partículas menores

4. Mecanismos de Separação

   • Adsorção
     • Ocorre na interface entre a FM e FE
     • FM = Apolar e FE = Polar
   • Partição
     • *Filmes espessos de FE líquida  *Interação forte entre a FE líquida e o analito (grande solubilidade) *Grande superfície líquida exposta à fase móvel
     • Ocorre no interior do filme da FM
   • Troca iônica
     • Grupos trocadores de íons presentes n superfície da FE
     • Me+n + (-Resina)-SO3H = H+ + [(-Resina)-SO3Me]+n-1
     • An-n + (-Resina)-NH4Cl = Cl- + [(-Resina)-NH4An]-n+1
   • Exclusão por tamanho
     • Aplicação: Moléculas grandes como proteínas, aminoácidos, etc.
     • Moléculas retidas
       • Moléculas pequenas são retiras dentro dos poros da FE
     • Moléculas Carregas
       • Moléculas grandes são carregadas pela FM
   • Bioafinidade

5. Fase quimicamente ligada

   • Fase Reversa
     • Compostos com baixa polaridade
     • FM: Polar e FE: Apolar
   • Fase normal
     • compostos com elevada polaridade
     • FM: Apolar e FE: Polar

6. Componentes essenciais da cromatografia líquida moderna

   • Solvente ou eluente
   • Bomba de alta pressão
     • Está relacionado ao tempo de retenção, reprodutibilidade e sensibilidade do detector
     • Deve ter a capacidade de impulsionar a fase móvel
     • Bomba
     • Controlador de vazão e pressão
   • Sistema de Injeção
     • Pode ser feito por uma válvula de amostragem ou seringa
     • Coletor de purga de amostra pela alça
   • Coluna
     • Aço inoxidável polido
     • comprimento de 10 a 30 cm
     • Tipo
       • Capilar
         • menor ou igual a 1 mm
       • Analítica recheada
         • De 2, 3, 4, 5 e 6 mm
       • Preparativas
         • Maiores que 10 mm
     • Recheios
       • Grânulos porosos
       • Grânulos de camada porosa
       • Sílica totalmente porosa
     • Coluna de Guarda
       • Em caso de contaminação a coluna de guarda que é afetada, protegendo o restante da coluna e facilitando a manutenção. 
   • Detector
     • O detector recebe o sinal, transduz para um sinal elétrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente.
     • Transdutores: dispositivos capazes de transformar as moléculas que chegam ao seu interior em sinal elétrico. 
     • Tipos
       • Índice de refração
       • Condutividade
       • Detectores espectrofotométricos
       • Fluorescência
       • Eletroquímica
   • Coletor de solvente
   • Sistema de registro e tratamento de dados

7. Amostras

   • Deve ser filtrado

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