Decalcificación de tejido óseo.

Decalcificación de tejido óseo.

1. Corte de hueso

   • Cuando hay minerales en los tejidos, como por ejemplo en el hueso, dentina, o en procesos patológicos calcificantes en tejidos blandos, es muy difícil obtener buenas secciones finas, bien sea de material incluido en parafina o de material en congelación. En estos casos el proceso histológico debe incluir un paso en el que se eliminan tales minerales denominado generalmente como descalcificación

2. Decalcificadores: Tipos, Métodos, Ventajas y desventajas

   • Basados en ácidos
     • Hay dos grupos de ácidos: los fuertes (inorgánicos) y los débiles (orgánicos). Los ácidos fuertes suelen ser rápidos pero son muy agresivos por lo que el tiempo debe ser el mínimo posible, ya que si es excesivo producen daños en los núcleos y maceran el tejido. Los ácidos débiles son más lentos pero preservan mejor al tejido. Los ácidos fuertes más usados son el ácido clorhídrico, el ácido nítrico, mientras que el débil es el ácido fórmico. Cuanto más agresivos son los ácidos más se deterioran las enzimas y los antígenos para realizar pruebas enzimáticas o inmunocitoquímicas. Los ácidos también deterioran los ARN citosólicos por lo que las hibridaciones in situ se ven comprometidas El ácido clorhídrico y el ácido nítrico se suelen usar al 5-10 % en agua. Descalcifican rápidamente y su acción no debería prolongarse más de 24-48 horas. No se recomiendan para inmunocitoquímica ni ensayos enzimáticos. Se emplean para muestras pequeñas y diagnósticos rápidos. El ácido fórmico es el ácido
     • Agentes quelantes
       • Los agentes quelantes son aquellas sustancias orgánicas que pueden unirse covalentemente a iones metálicos formándose un compuesto soluble llamado quelato de metal. El EDTA (ácido etilendiaminotetraacético) secuestra iones de calcio, presentes en los cristales de hidroxiapatita del hueso, por lo que progresivamente irá disminuyendo el tamaño del cristal. Se usa entre el 10 y el 14 % en soluciones acuosas o tamponadas. Es un proceso lento, la descalcificación se puede extender durante semanas, pero aporta una buena preservación de la estructura tisular. Se puede acelerar el proceso aumentando el pH de la solución (superior a 7), pero esto puede afectar a la calidad del tejido. El EDTA une calcio superficial del cristal y por tanto lo que se produce es una reducción progresiva del tamaño de los cristales. Es un proceso muy lento (6 a 8 semanas) pero que no daña el tejido. Así, cuando el tiempo no es importante es el método recomendado. La solución deberia cambiarse cada 3 a 5 días.

3. Inmunohistoquímica: Diferentes pruebas especificas

   • La inmunocitoquímica es una técnica para la localización de moléculas en los tejidos mediante el empleo de anticuerpos. Es una técnica que gracias a la oferta comercial de anticuerpos y a la estandarización de su protocolo se ha convertido en un método sencillo, rápido y muy potente. Se basa en la gran especificidad y alta afinidad que tienen los anticuerpos para reconocer a moléculas y unirse a ellas. Además, la conjugación o combinación de los anticuerpos con enzimas o con sustancias fluorescentes permite detectar cantidades ínfimas de moléculas presentes en el tejido.

Bilder und Dateien der Mindmap