Técnicas de Hibridación

Técnicas de Hibridación

1. Principio

   • Desnaturalización de cadenas complementarias
   • Únion de dos cadenas complementarias

2. Southern blot

   • Determina la presencia de un gen o frag. de DNA
     • En una mezcla de ác. nucleicos prev. extraidos
   • Procedimiento
     • Aislamiento DNA
     • Digestión
       • Enzimas restricción
     • Separación
       • Electroforesis
     • Desnaturalización DNA
       • Álcalis
     • Transferencia del gel
       • Soporte solido
         • Capilaridad
         • Vacío
         • Electrotransferencia
     • Id. por sonda marcada
       • Hibridación
         • Unión sonda - molecula interés
       • Revelado: placas de rayos X
   • Aplicaciones
     • Id. genes asociados enf. trans. genética
     • Id. mutaciones
     • Detección polimorfismos

3. Northern blot

   • RNA
     • NO enzimas rest.
     • Procedimiento
       • Electroforesis
       • Desnaturalización
       • Transferencia
       • Hibridación
   • Aplicaciones
     • Estudios RNAm y su regulación
     • Variaciones RNA en difs. condiciones experimentales
     • Comparar condiciones clínicas normales o patológicas

4. Dot/slot blot

   • Aislamiento y separación ác. nucleicos
   • Aplicación directa a medio solido
     • SIN electroforesis
       • Fijación al vacío
         • Molde con pocillo:
           • Lineal
             • Slot blot
           • Punto
             • Dot blot
   • Detección cualitativa y cuantitativa
     • Diluciones seriadas de [ ] conocidas del genoma

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