Técnicas de tinciones microbiológicas

Técnicas de tinciones microbiológicas

1. Tipos

   • Simples
     • Características
       • Información acerca de forma, tamaño y tipo de agrupación
     • Colorante
       • Único
         • Básico
           • Cargas(+)
             • cristal violeta, safranina y fuscina
         • Ácido
           • Cargas (-)
             • Eosina, fuscina ácida
     • Tipos
       • T. de Wirtz o Shaef Fulton
         • Pasos
           • 1.- Preparar el frotis bacteriano que se va a teñir. 2.- Colocar un trozo de papel de filtro, del tamaño de la extensión, encima de ella. 3.- Añadir el colorante verde malaquita para que cubra bien la extensión. 4.- Pasar la preparación por encima de la llama del mechero bunssen para fijar el colorante, durante cinco minutos. 5.- Retirar el papel de filtro y lavar con agua destilada para eliminar el exceso de colorante. 6.- Teñir la preparación con safranina, para el contraste, durante un minuto. 7.- Lavar con agua destilada hasta eliminar el exceso de colorante. Secar la preparación al aire, o entre dos papeles de filtro, teniendo especial cuidado en el segundo caso para no arrastrar la extensión. 8.- Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.
         • Científico
           • Alicia Shaeffer y MacDonald Fulton
         • Caractrísticas
           • Tiñen exoesporas y endoesporas
             • C. tetani, C. tertium, C Novi
   • Diferenciales
     • Características
       • Distinguir tipos de microorganismos
     • Colorante
       • Dos colorantes
     • Tipos
       • T. Ziehl Neelsen
         • Científicos
           • Franz Ziehl y Karl Adolf Neelsen.
         • Caracterísiticas
           • Permite diferenciar bacterias resistentes a la decoloración ácido-alcohol y las que no. Sensibilidad 74%. Especificidad 97%
             • M. tuberculosis, Phylum Apicomplexa
         • Pasos
           • 1.- Realizar un frotis bacteriano de la cepa y fijar la extensión con calor. 2.- Añadir el primer colorante: Carbofucsina. 3.- Se pasa por el mechero varias veces, durante cinco minutos, sin permitir que hierva el colorante. 4.- Decantar y lavar con agua destilada el exceso de colorante. 5.- Decolorar con alcohol/ácido hasta que la muestra tenga un color rosado. 6.- Lavar con agua destilada. 7.- Teñir con el colorante azul de metileno durante un minuto. 8.- Lavar con agua destilada hasta retirar el exceso de colorante. 9.- Secar la extensión al aire. 10.-Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.
       • Tinción de Gram
         • Científico
           • Hans Christian Gram
         • Características
           • gram (+) moradas
             • S. aureus, Clostridium tetani, S. agalatiae, S mutans
           • gram (-) rosas
             • E. coli, Salmonella typhi, Brucella abortus
         • Pasos
           • 1.- Tomar con el asa bacteriológica una cepa de bacterias 2.- Colocarlo en el portaobjetos 3.-Pasarlo por la flama del mechero de Bunsen tres veces 4.-Añadir el cristal violeta (1 min) 5.-Enjuagar con agua 6.-Agregar lugol (2 min.) 7.- Enjuagar con agua 8.-Decolorar con alcohol 9.-Enjuagar con agua 10.- Teñir con safranina 11.- Enjuagar con agua 12.- Observar al microscopio
       • Tinción de Leifson
         • Pasos
           • 1.Se fija químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en un portaobjetos. 2.Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno. 3.Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante rosanilina, de preparación extemporánea. El ácido tánico engruesa los flagelos y la rosanilina los tiñe. 4.Se retira el exceso de colorante con agua. 5. Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio.
         • Científico
           • H. Leifson
         • Características
           • Tiñe flagelos

2. Objetivo

   • Colorear los microorganismos y poder observarlos al microscopio

3. ¿Qué son?

   • Procesos por los cuales las moléculas de un colorante se absorben a una superficie celular
     • Parásitos
     • Bacterias

4. Importancia clínica

   • Diagnosticar enfermedades

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