Inmunofluorescencia Indirecta

Inmunofluorescencia Indirecta

1. Rossy Mishel Lara Rustrian 200-17-19

2. Metodología

   • Segunda parte
     • El resultado de la etapa anterior es incubado con el trasador fluorescente que es un suero anti gama globulina llamado conjugado y se marca con isotiocianato de fluorosceina y se realiza una segunda etapa de lavado para eliminar el sobrante conjugado y el sustrato anticuerpo conjugado es leído en microscopio de fluorescencia
       • Tras la renovacion de PBS, se deja otros 5 minutos en la jarra coplin, se retira la primera impronta de la jarra de coplin y la sacudimos suavemente en papel absorvente y secamos su parte posterios, sin pasar el papel secante entre las areas, para despues poner el conjugado cubriendo las areas reactivas y colocaremos las laminas en las camaras humedas
         • Se debe colocar bien el conjugado para tener buenos resultados, por lo qseue no se deben secar las areas de las improntas para tener un buen resultado, y se retiran las siguientes improntas del coplin y se procesan todas las improntas y se realiza una segunda incubacion de 30 minutos en la camara humeda y repetimos el proceso de lavado y se trabaja con una impronta por vez y retiraremos el exceso de pbs con papel absorventrte
           • Se coloca el medio de montaje, sin colocarlo en exceso para poder verse en el microscopio y de esa manera poder verla correctamente en el microscopio
   • Primera Parte
     • La muestra desuero es incubada con el sustrato antigenico, los anticuerpos que se buscan en la muestra se van a unir al sustrato y formaran un complejo inmune estable intigeno anticuerpo y el resto de componentes en la muestra son eliminados durante la primera fase de lavados
       • Se crea un esquema de trabajo para llevar todos los registros de manera ordenada y llevar un registro del ensayo y calcular las cantidades de los reactivos, se deben dejar que los reactivos tengan una temperatura ambiente entre 20 y 25 grados
       • Se crea un buffer de 7,2 pH utilizando fosfato salino, y en un matraz, agregamos 1 litro de H2O destilada, al homogenizar y tener lista nuestro buffer se realizan las diluciones de las muestras: se colocan 20 microlitros de muestra y 780 microlitros del Buffer y se homogenizan
       • Se sacan las improntas de su envoltorio , se toma el sobre por los costados sin precionar el porta objetos para evitar daños en el sustrato y sin tocar las areas reactivas, se agrega un numero a las laminas para identificar
         • Se siembran las muestras segun nuestro registro sin tocar el sustrato, se incuban las muestras en una camara humeda a 30 grados, y se realiza la primera etapa de lavado, usando un apice llena de PBS
           • Inclinaremos la impronta hacia uno de los lados y verteremos el Buffer sobre las areas de la hilera ubicadas abajo para evitar la contaminacion cruzada, se realiza este lavado con piceta en las 2 hileras, y se coloca la improta en una jarra de coplin con PBS, se procede de la misma manera con todas las laminas en oreden de sembramiento, tras 5 minutos renovaremos el buffer y volvemos a incyubar