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Beschreibung
Mindmap von Erick Merino Castillo , aktualisiert more than 1 year ago
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Erstellt von Erick Merino Castillo
vor mehr als 3 Jahre
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Células de tabaco transgénicas que
producen el anticuerpo monoclonal
humano contra el antígeno de superficie
del virus de la hepatitis B
- Introducción
- La línea celular humana TAPC301-CL4 se
originó a partir de líneas de células B
transformadas con el virus de
Epstein-Barr (EBV)
- Solo se necesitan sacarosa, minerales y
algunas hormonas vegetales para hacer
crecer los cultivos de tejidos vegetales.
- Se clonó el ADNc de todo el
CL4MAb y se introdujo en el
genoma de cultivos en
suspensión de células de
tabaco.
- El CL4MAb se expresó en cultivos de plantas de
tabaco, purificando las propiedades y se
compararó con las del CL4MAb-l secretado por las
células TAPC301-CL4
- El CL4MAb se expresó en cultivos de plantas de
tabaco, purificando las propiedades y se
compararó con las del CL4MAb-l secretado por las
células TAPC301-CL4
- Se clonó el ADNc de todo el
CL4MAb y se introdujo en el
genoma de cultivos en
suspensión de células de
tabaco.
- La HBIg también se usa de
manera profiláctica para
evitarla hepatitis B
- Solo se necesitan sacarosa, minerales y
algunas hormonas vegetales para hacer
crecer los cultivos de tejidos vegetales.
- La línea celular humana TAPC301-CL4 se
originó a partir de líneas de células B
transformadas con el virus de
Epstein-Barr (EBV)
- MATERIALES Y MÉTODOS
- Construcciones de vectores binarios
- Se muestran en las series
B29, B30 o B31
- Las células transgénicas se
propagaron en tres
plásmidos.
- El p29 contenía las secuencias líderes originales. En el
p30, las LS fueron reemplazadas por la codificación de
ADN sintetizada y para la secuencia de secreción (SS)
- Las secuencias de iniciación de la traducción (IS) se
cambiaron de GTCGA-CATG a AACAATG para mejorar la
expresión de los anticuerpos
- Finalmente El b-glucuronidase-NosT del vector
pBI101 fue sustituido por los cassettes Ab
- Finalmente El b-glucuronidase-NosT del vector
pBI101 fue sustituido por los cassettes Ab
- Las secuencias de iniciación de la traducción (IS) se
cambiaron de GTCGA-CATG a AACAATG para mejorar la
expresión de los anticuerpos
- El p29 contenía las secuencias líderes originales. En el
p30, las LS fueron reemplazadas por la codificación de
ADN sintetizada y para la secuencia de secreción (SS)
- Las células transgénicas se
propagaron en tres
plásmidos.
- Se muestran en las series
B29, B30 o B31
- Transformación de la cultura de la
suspensión del tabaco
- Para la transformación se utilizó
ElectroMAX TM Agrobacterium tumefaciens
Células LBA4404 por electroporación
- Se seleccionaron células resistentes a la
kanamicina en placas de Murashige y
Skoog (MS)
- Estas células Las células transgénicas se
propagaron durante 7 días a 268°C en la
oscuridad, bajo las mismas condiciones
utilizadas para las células BY-2
- Estas células Las células transgénicas se
propagaron durante 7 días a 268°C en la
oscuridad, bajo las mismas condiciones
utilizadas para las células BY-2
- Se seleccionaron células resistentes a la
kanamicina en placas de Murashige y
Skoog (MS)
- Para la transformación se utilizó
ElectroMAX TM Agrobacterium tumefaciens
Células LBA4404 por electroporación
- Construcciones de vectores binarios
- Resultados
- Generación de células de tabaco
transgénico
- Se obtuvieron tres series de células transgénicas
de suspensión de tabaco BY-2
- Para la prueba ELISA se utilizaron extractos de pequeñas
proteínas de cultivos de 7 días
- El tiempo de la síntesis de anti-HBs se determinó
cuantificando las cantidades de proteínas IgG
humanas en los extractos totales
- Los porcentajes de IgG humana en la TSP
fueron aproximadamente 0.2% para B29-4,
0.6% para B30-3, y 0.25% para las células
B31-7
- Las células B30-3 crecieron bien y alcanzaron
rápidamente la densidad de saturación. Las células
B31-7 crecieron lentamente y no alcanzaron la
densidad de saturación hasta 10-14 días.
- Las células B30-3 crecieron bien y alcanzaron
rápidamente la densidad de saturación. Las células
B31-7 crecieron lentamente y no alcanzaron la
densidad de saturación hasta 10-14 días.
- Los porcentajes de IgG humana en la TSP
fueron aproximadamente 0.2% para B29-4,
0.6% para B30-3, y 0.25% para las células
B31-7
- El tiempo de la síntesis de anti-HBs se determinó
cuantificando las cantidades de proteínas IgG
humanas en los extractos totales
- Para la prueba ELISA se utilizaron extractos de pequeñas
proteínas de cultivos de 7 días
- Se obtuvieron tres series de células transgénicas
de suspensión de tabaco BY-2
- Purificación de los anticuerpos a partir de células de tabaco transgénicas
- Las cantidades de anticuerpos purificados del medio fueron
similares entre las líneas celulares B29-4, B30-3 y B31-7
- La purificación fue de 16,2 mg de IgG humana de
1 L de un cultivo de 10 días de células B30-3.
- Las bandas principales de cadenas pesadas (H) y
ligeras (L) de los MAbs eran casi todas del mismo
tamaño.
- La diferencia entre los tres MAbs era la
presencia de bandas de tinción débil entre las
posiciones de las cadenas H y L
- La diferencia entre los tres MAbs era la
presencia de bandas de tinción débil entre las
posiciones de las cadenas H y L
- Las bandas principales de cadenas pesadas (H) y
ligeras (L) de los MAbs eran casi todas del mismo
tamaño.
- La purificación fue de 16,2 mg de IgG humana de
1 L de un cultivo de 10 días de células B30-3.
- Las cantidades de anticuerpos purificados del medio fueron
similares entre las líneas celulares B29-4, B30-3 y B31-7
- Generación de células de tabaco
transgénico
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