ELECTROFORESIS CAPILAR

ELECTROFORESIS CAPILAR

1. TECNICA DE SEPARACION para el analisis y purificacion de biomoleculas

   • permite Id y cuantificar analitos que tienen una matriz compleja

2. Es la migracion de especies carrgadas que se encuentran disueltas o suspendidas en un electrolito, que por la influciencia de un campo electrico, los cationes migran hacia el electrodo negativo (cátodo) y los aniones migran hacia el electrodo positivo (ánodo)

3. TIPOS DE SEPARACIÓN

   • EC EN GEL O REDES POLIMÉRICAS
     • diferencia de tamaños y carga
     • Capilar relleno con gel que actúa como tamiz molecular
     • Separacion de proteínas y ác. nucleicos.
       • las moléc. se separan al moverse a través de una red de polímero que actúa como un tamiz molecular.
         • las moleculas grandes poseen con más obstaculos que las pequeñas, por lo que su tiempo de migracion es >.
   • ISOELETROENFOQUE CAPILAR
     • Capilar lleno de distintos buffers. Un extremo del capilar sumergido en solución ácida y el otro en solución alcalina. Se genera gradiente de pH a lo largo del capilar.
     • los analitos migran hasta alcanzar el pH donde son neutros (punto isoeléctrico). Una vez completada la focalización se alcanza un estado estacionario (no fluye corriente en el capilar). Para la detección, las zonas son movilizadas hacia el detector por aplicación de presión al capilar o adición de sal a uno de los reservorios.
   • ELECTROCROMATOGRAFÍA CAPILAR
     • interacciones diferenciales de un analito en dos fase
     • Capilar funcionalizado con fase estacionaria
   • ELECTROFORESIS CAPILAR DE ZONA
     • separación de analitos según su movilidad en solución
       • El pH del buffer de fondo es la clave de la separación ya que determina el grado de ionización y por lo tanto la movilidad relativa de los diferentes analitos. Debe tener también baja absortividad a la longitud de onda de detección y baja movilidad electroforética para minimizar el paso de corriente.
     • Capilar lleno de electrolito de fondo y aplicación de campo eléctrico
   • CROMATOGRAFÍA ELECTROCINÉTICA MICELAR
     • interacciones hidrofóbicas/iónicas de analitos con micelas
     • permite separa analitos neutros y con cargas
     • Capilar lleno de electrolito de fondo que contiene tensioactivo
     • la separacion se debe las diferencias en la movilidad electroforética y a las diferencias en las interacciones con la fase pseudoestacionaria que presenta cada compuesto.
     • es una TÉCNICA HÍBRIDA entre HPLC y EC
       • el STE es transportado por medio del flujo electroosmótico y NO por presion como en HPLC
   • ISOTACOFORESIS
     • separación en el interior de la zona delimitada por dos buffers
       • •Se usa un capilar neutro empacado con algun gel.• Se administran anfolitos generando un gradiente de pH dentro del capilar. • La muestra se prepara en un medio que permita tenerla con carga eléctrica y se inyecta en el capilar. • Los compuestos se separan segun su PI, al aplicar un potencial. •Detección en línea.
     • velocidad uniforme. Esto quiere decir que el tiempo de recorrido en el capilar bajo condiciones isotacoforética es independiente de la velocidad. Es una técnica de separación por desplazamiento.

4. ENTORNO DENTRO DEL CAPILAR Y PROPIEDAES

   • ENTORNO
     • ANALITO
       • masa
       • carga neta
       • tamaño y forma
     • BUFFER (medio)
       • viscosidad
       • cte dieléctrica
       • T°
       • pH
       • fuerza ionica
     • CAMPO ELÉCTRICO
       • es un espacio físico donde interactuan cuerpos y sistemas con naturaleza eléctrica
       • voltaje aplicado
       • long
       • fuerzas conductoras
     • PARED DEL CAPILAR
       • carga superficial: grupos silanol(-)
       • recubierto por POLIMIDA
       • flujo electroosmóticos: es el flujo de arrastre en el que las particulas viajan a distintas velocidades
         • FLUJO ELECTROOSMÓTICO (FEO)
           • el FEO puede ser eliminado permanente//, si se modifica la pared del capilar o temporal//, recubriendo la pared del capilar con algun polímero adicionando al electrolito soporte
           • PARAMETROS QUE LO AFECTAN
             • •campo electrico cuando tiene una carga (-); •pH del buffer; • fuerza ionica o [ ↑ ] del buffer; • T°; • modificadores organicos; •sufectantes (recubren a C/analito p/ otprgarle otra carga; • cubrimientos covalentes; • polímeros hidrofílicos neutros

5. PARÁMETROS

   • •fuerza del campo electrico; •velocidad electroforética; •movilidad electroforética; •efecto del pH del buffer; •efecto del campo electro