Practica: Moscas Transgénicas

Practica: Moscas Transgénicas

1. Paso l: Preparacion de ADN la cual sera inyectado en los embriones de mosca

   • En donde una enzima de restricción corta la secuencia de ADM

2. Paso l: Preparación de ADN

   • En este paso las enzimas de restricción son utilizadas para cortar la secuencia de ADN para tener como resultado la secuencia de ADN de la enzima luciferasa.
   • El Promotor se corta y aisla el ADN de la mosca para dar una secuencia promotora
   • Los segmentos se reorganizan en un orden correcto y se ligan entre si y se de ADN se insertan en un vector plasmido circular, al igual de el ADN transposasa
   • Se coloca el ADN construido en agujas de vidrio con ayuda de una micropipeta

3. Paso ll: Preparación de embriones de mosca para inyección

   • Obtención de embriones de mosca, las cuales son depositadas en el fondo del viales cilíndricos, el tiempo para la recolección debe de ser menor a 30 min
   • Se se lavan los embriones y se recogen con ayuda de un cepillo, y se colocan en un filtro.
   • Con ayuda del cepillo se colocan los embriones en un porta objetos y se observan en un microscopio de disección para orientarlos, de modo que el extremo posterior apunte a la misma dirección

4. Etapa lll: Inyectar embriones de mosca con ADN construido

   • El portaobjetos que contiene a los embriones acomodados en la misma posición, se coloca en el micromanipulador
   • Se realiza la inyección con las agujas previamente cargadas con el ADN construido, la cual se inyectara en la zona posterior del embrión, el proceso no puede tardar mucho ya que el embrión podria secarse y morir
   • Los embriones inyectados se guardan en un matraz de guarderia en donde se mantienen hasta convertirse en adultos

5. Etapa lV: Criar Moscas

   • Después de un tiempo los embriones se han convertido en moscas adultas con ojos blancos, en donde algunos tienen células germinales que contienen el transgen. estas se deberán aparear con moscas no inyectadas y esperar que una parte de la progenie contenga células transgénicas
   • Despues de que se aparearon, en la placa se depositaron los embriones, los cuales hay que retirarlos y colocarlos en un nuevo vial para moscas

6. Parte V: Selección de la Progenie transgenica

   • Las moscas adultas, son llevadas a una maquina para anesteciarlas con la aplicacion de Dioxido de carbono
   • Se retira el cilindro del embudo y las moscas son colocadas en un portaobjetos para identificarlas

7. Etapa Vl: Examinar la produccion de luz en moscas adultas trangenicas

   • Se coloca una mosca de ojos rojos en cada posillo de la placa, cada pocillo contiene alimento con luciferina
   • Se carga la placa en el contador de bioluminiscencia, el cual dara luz a las moscas y este contara la salida de luz de las moscas en un periodo de 5 dias