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transformación del estado físico de la sangre en fibrina

intervienen

factores de coagulación

Precalicreína o factor Fletcher

forma parte del sistema de activación de los factores de contacto.

Proteína C.

La proteína C tiene una capacidad de liberar de la pared endotelial el activador del plasminógeno. La deficiencia hereditaria de la proteína C está asociada a trombosis venosa

Proteína S.

Su función es como cofactor de la proteína C.

factores de importancia clínica

I, II. VIII, IX, X, XI, XIII

factores de contacto que intervienen en las primeras fases de la coagulación:

XII, XI, precalicreína, cininógeno de peso molecular alto

Factores dependientes de la vitamina K:

II, VII, IX, X, Proteína C y S.

via extrinseca

Cuando la sangre es expuesta a extractos tisulares, el factor X es generado rápidamente

Vía intrínseca

requiere de la participación de seis procoagulantes XII, XI, Precalicreína y Cininógeno de alto peso molecular, el IX y el VIII

agentes que inician la fase de contacto están cargados negativamente

Vía común

el Xa interacciona con el V, FP3, iones calcio activando la protrombina.

unión del factor Xa, V, fosfolípidos (FP3) y calcio= protrombínico

Ensayo de fibrinógeno

esqueleto fundamental del coágulo.

Las proteínas implicadas circulan en forma inerte (cimógenos)

cofactor

permite que una factor de la coagulación actué sobre otro

Cininógeno de Alto Peso Molecular o factor Fitzgerald-Williams- Flaujeac.

se requiere de su presencia para una adecuada activación del factor XI en presencia del XII de precalicreína y de caolín.

son proteínas a excepción del calcio y los fosfolípidos de las plaquetas. 2. El calcio está presente en la mayor parte de las etapas de la coagulación. 3. El fosfolípido 3 plaquetario FP3. 4. Tromboplastina tisular o factor tisular

forma inactiva en el plasma XI

enzimas. XIa

Factor I. Fibrinógeno

Factor II. Protrombina

Factor III. Tromboplastina tisular. Tromboplastina plaquetaria, Factor hístico

Factor IV. Calcio

Factor V. Acelerina, proacelerina, factor lábil

Factor VII. Proconvertina, factor estable o convertina

Factor VIII Antihemofílico (FAH), globina antihemofílica (GAH), factor antihemofílico A.

Han sido definidas tres fracciones de la molécula del factor VIII. De acción procoagulante, denominada F.VIII:C.

Factor IX. Componente de la tromboplastina en el plasma (CTP), factor antihemofílico B, factor Christmas

El factor IX se sintetiza en el hígado y es vitamina K dependiente. Es uno de los factores de la fase de contacto, tiene actividad enzimática al ser activado por el XIa y forma con el factor VIII, calcio y el fp3 el complejo activador del factor X.

Factor X. Factor Stuart, factor Prower (FSP).

Se sintetiza en el hígado, es vitamina K dependiente y ocupa su puesto clave en la activación de la protrombina.

Factor XI. Antecedente plasmático de la tromboplastina (PTA) o (ATP).

fase de contacto. Es activado por el XIIa sin la presencia de calcio.

Factor XII. Factor Hageman, factor de contacto

Es activado XIIa por contacto con superficies de carga negativa y por vía proteolítica con enzimas como calicreína, tripsina y plasmina.

Factor XIII. Factor estabilizador de la fibrina o fibrinilasa

El factor XIIIa hace más estable e insoluble la fibrina y por lo tanto más resistente a la acción de la plasmina.

factores activados

capacidad para romper enlaces en los que el aminoácido presente es serina, por lo que se denominan serinproteasas.

tres pares de cadena polipeptídicas de síntesis hepática

principal propiedad es ser coagulable por la trombina

se sintetiza en el hígado

precursor plasmático de la trombina

liberado al plasma cuando se produce una lesión vascular

Los iones calcio se necesitan en todas las etapas de la coagulación a excepción de la fase de contacto y activación del factor XIII por la trombina

cofactor formando un complejo con el Xa, FP3, la tromboplastina tisular y los iones calcio denominado Protrombinasa

el factor VII necesita la intervención de la tromboplastina tisular y del calcio para su acción sobre el factor X.

tromboplastina tisular (TBPL)

tienen más concentración de ella son el cerebro, pulmón, placenta, hígado, riñón y en la pared de los grandes vasos.

El factor III se une al factor VII dando un complejo enzimático activo que en presencia de iones calcio activa al factor X.

Una vez que el coágulo es retraído, puede separarse y el líquido sobrenadante, se llama suero y no contiene los siguientes factores: I, V, VIII, XIII.

Tiempo de Protrombina.

El estudio es desarrollado por la adición de una tromboplastina completa a la sangre con anticoagulante y midiendo el tiempo de coagulación después de la adición de calcio

Se puede encontrar anormal en las siguientes situaciones

Deficiencia congénita de los factores I, II, V, VII y X.

Deficiencia múltiples como sucede en los pacientes con cirrosis hepática, deficiencia de vitamina K,

La presencia de anticoagulantes circulantes

Reactivos

 Citrato de sodio al 3.8 % u oxalato de sodio al 0.1 M.

 Reactivo de tromboplastina tisular. Se dispone de numerosas preparaciones comerciales. La mayoría traen con la tromboplastina tisular, unos frascos de cloruro de calcio.

 Plasma control normal y anormal

Procedimiento.

1. ponga 4.5 mL de sangre en 0.5 mL de anticoagulante y mezcle. Puede usarse tubo vacutainer o la técnica de doble jeringa.

2. Centrifuge la sangre a 3,000 rpm por 10 minutos, tan pronto como sea posible; separe el plasma y póngale en refrigeración. Si se va a usar inmediatamente puede dejarlo a temperatura ambiente.

3. Pipetear 0.1 mL de tromboplastina tisular en un tubo de prueba y póngalo a 37 °C por aproximadamente un minuto. Después ponga 0.1 mL de plasma y deje incubar por exactamente un minuto esta mezcla (verificar tiempos de intubación dependiendo de la marca del reactivo).

4. Añada 0.1 mL de cloruro de calcio precalentado a 37ºC y eche a andar un cronómetro. Rápidamente agite el tubo y consérvelo en el baño hasta la formación de la malla de fibrina que forma coágulo, Detenga el cronómetro.

5. En el caso de sacar el tubo del baño de agua, inclínelo rápidamente frente a una buena fuente de luz, detenga el cronómetro hasta la formación del coágulo de fibrina. Repita la prueba con el segundo tubo. Puede usarse un fibrinómetro.

6. Pruebe un plasma normal y un anormal; reporte el resultado del paciente y del control normal.

7. OPCIONAL. Si la prueba se prolonga en un paciente que no sabe que está tomando anticoagulante, la prueba debe repetirse, usando 0.1 mL de una mezcla hecha de 0.2 mL de plasma del paciente y de 0.2 mL de plasma normal. también se puede probar

Tiempo de Protrombina Diferencial

La única deficiencia en los factores de coagulación que produce un TP prolongado con un TTPA normal es la deficiencia del factor VII, por lo tanto el TP diferencial solo se realiza cuando ambos TP

Reactivos.

 Plasma absorto (contiene factores: I y V).

 Suero envejecido (contiene factores VII y X).

 Los reactivos restantes son los mismos que se usan para el TP.

Procedimiento.

Esta prueba se hace de la misma manera que el TP excepto que aquí se prueba 0.1 mL de cada una de las siguientes mezclas:

1.

0.1 mL de PN

+

0.4 mL de PPb

2.

0.4 mL de PN

+

0.1 mL de plasma adsorto

3.

0.4 mL de PN

+

0.1 mL de suero envejecido

4.

0.4 mL de PPb

+

0.1 mL de plasma adsorto

5.

0.4 mL de PPb

+

0.1 mL de suero envejecido

Valor Quick

Razón de normalización internacional (INR).

El INR se usa especialmente para los pacientes tratados con anticoagulantes orales

Índice de sensibilidad internacional (ISI).

finalidad de aminorar las diferencias entre los reactivos de tromboplastina

Cálculo del INR: INR = (TP del paciente/TP del plasma control) ISI

factor XII

hidroliza al proactivador del plasminógeno transformando la proteína en activador del plasminógeno el cual se rompe para producir plasmina.

La calicreía, la plasmina y el factor XIa junto con el CPMA rompe más XII produciendo factor XII activado.

Evaluación

se utilizan plasma

TPT

TPT

estos estudios se agrega tromboplastina parcial como la cefalina o la inositina (un fosfolípido de soya) que son sustancias que tienen la misma actividad que el factor tres plaquetario (FP3).

Reactivos.

 Citrato de sodio al 3.8 % u oxalato de sodio 0.1 M.

 Reactivo de tromboplastina parcial.

 Cloruro de calcio 0.025 M.

 Plasma normal (o control comercial).

1. Ponga 4.5 mL de sangre a 0.5 mL de solución anticoagulante y mezcle. Pueden usarse tubos vacutainer, si el tubo usado es el segundo extraído.

2. Centrifugue la sangre inmediatamente por 10 minutos a 3,000 rpm, retire el plasma, refrigérelo hasta su uso. No debe trabajarse después de dos horas.

3. Ponga una alícuota de plasma normal en un baño a 37 °C a calentar y hacer lo mismo con el cloruro de calcio.

4. Pipetear 0.1 mL de reactivo de tromboplastina parcial activada en cuatro tubos de vidrio, déjelos calentar a 37 °C por tres minutos (verificar tiempos de incubación dependiendo de la marca del reactivo).

5. Pipetear 0.1 mL de plasma normal en uno de los tubos que contiene el reactivo y mezcle suavemente. Incube por dos minutos.

6. Añada a la mezcla anterior 0.1 mL de cloruro de calcio precalentado a 37ªC y eche a andar el cronómetro.

7. Incline el tubo suavemente, no más de una vez por segundo. Detenga el cronometro cuando se empiecen a formar hebras de fibrina. Repita la prueba con el segundo tubo.

8. Pruebe el plasma del paciente de la misma manera que el plasma normal. haga siempre determinaciones por duplicado.

Suero envejecido, SNE (contiene factores: IX, X, XI y XII).

 En un tubo de vidrio sin anticoagulante ni aditivos, tomar muestra de sangre sin anticoagulante (2 mL).

 Dejar coagular (mínimo 15 minutos).

 Separar el suero a 2000 rpm 10 minutos.

 Almacenar a 4°C por tres días.

Reactivos para las determinaciones:

 Todos los reactivos usados en el tiempo de tromboplastina parcial activado y T. protrombina

Procedimiento.

Esta prueba se hace de la misma manera que el tiempo de tromboplastina parcial activado, excepto en el paso 5, en el cual se hace de la siguiente manera:

1. Haga las siguientes mezclas:

1.

0.1 mL de PN

+

0.4 mL de Ppb

2

0.4 mL de PN

+

0.1 mL de plasma absorto

3.

0.4 mL de PN

+

0.1 mL de suero normal envejecido

4.

0.4 mL de Ppb

+

0.1 mL de plasma absorto

5.

0.4 mL de Ppb

+

0.1 mL de suero normal envejecido

6.

0.2 mL de PN

+

0.2 mL de Ppb

2. Añada 0.1 mL de cada mezcla a 0.1 mL de reactivo de tromboplastina parcial activada e incube por dos minutos con agitación ocasional.

3. Ponga 0.1 mL de cloruro precalentado a 37ºC y eche andar un cronómetro.

TP

Es útil en el estudio de los factores de contacto, los factores VIII y IX y en la identificación de anticoagulantes circulantes; es el estudio de elección en el control de tratamiento con heparina.

modificaciones al tiempo de recalcificación del plasma

TPTA

Reactivos.

Citrato de sodio al 3.8 % u oxalato de sodio 0.1 M.

 Reactivo de tromboplastina parcial activado.

 Solución de cloruro de calcio 0.025 M.

 Plasma normal (se puede usar plasma normal comercial).

Procedimiento.

1. Ponga 4.5 mL de sangre a 0.5 mL de solución anticoagulante y mezcle. Pueden usarse tubos vacutainer, si el tubo usado es el segundo extraído

2. Centrifugue la sangre inmediatamente por 10 minutos a 3,000 rpm, retire el plasma, refrigérelo hasta su uso. No debe trabajarse después de dos horas.

3. ponga una alícuota de cloruro en un baño a 37 °C a calentar.

4. pipetear 0.1 mL de reactivo de tromboplastina parcial activada en el número de tubos que desee y póngalos en baño de agua. Déjelos calentar al menos por un minuto.

5. Ponga 0.1 mL de plasma normal en el primer tubo. Mezcle y deje incubar a 37 °C por exactamente dos minutos, agitando ocasionalmente. No permita que el tiempo de incubación se exceda cinco minutos.

6. Dispare con 0.1 mL de cloruro de calcio precalentado a 37ªC y eche andar un cronómetro.

7. Deje el tubo en baño de agua por 20 segundos y entonces retírelo e incline suavemente no más de una vez por segundo. Detenga el cronómetro cuando empiecen a formar hebras de fibrina. Repita la prueba con el segundo tubo.

8. Pruebe el plasma del paciente de la misma manera, por duplicado.

9. OPCIONAL. Si el tiempo de coagulación del plasma está prolongado por causa desconocida, el procedimiento debe repetirse con tiempos de incubación de 10 y 20 minutos. Esto se utiliza algunas veces para poder probar diferencias de tiempo de tromboplastina parcial activado. Plasmas deficientes en precalicreínas dan valores normales con reactivo de ácido elágico activado.

10. Si la incubación prolongada no corrige un tiempo de tromboplastina parcial activado, el procedimiento debe repetirse con 0.1 mL de una mezcla de 0.2 mL de plasma del paciente más 0.2 mL de plasma normal. también se pueden hacer estudios de una mezcla de 0.4 mL de plasma del paciente con 0.1 mL de plasma normal (20% de plasma normal).

factor v

El factor V activa a los factores XIII, VIII y a la proteína C e induce a la agregación de las plaquetas

Su principal acción es la degradación del fibrinógeno para convertirlo en fibrina.

La determinación del tiempo de coagulación método de Clauss

se mide utilizando el plasma diluido (1:10) agregando un exceso de trombina (100 U/mL) y se mide el tiempo de la formación del coágulo.

La cuantificación de la proteína coagulable

la mejor técnica para tener una medida cuantitativa de ka concentración de fibrinógeno

La concentración de la proteína coagulable es determinada midiendo el peso del coágulo formado por la adición del calcio y trombina midiendo el contenido proteico del plasma por el método de Biuret o de Folin-Ciocalteu.