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Description
Mind Map by David Estuardo Cobar, updated more than 1 year ago
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Created by David Estuardo Cobar
over 8 years ago
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CLONACIÓN
MOLECULAR
- La clonación de cualquier fragmento de ADN involucra los siguientes pasos
- 1) Preparación del inserto de ADN que se va a clonar: involucra la
digestión con enzimas de restricción para liberar el fragmento de
interés de la molecula de ADN completa.
- 2) Preparación del vector para la clonación:
- a) Corte con las mismas enzimas de restricción
con que se dirigió el inserto y obtener un ADN
lineal.
- b) Desfosforilación del vector con la finalidad de
impedir la autoligación del vector.
- c) Purificación del vector:
- c) Purificación del vector:
- b) Desfosforilación del vector con la finalidad de
impedir la autoligación del vector.
- a) Corte con las mismas enzimas de restricción
con que se dirigió el inserto y obtener un ADN
lineal.
- 3) Ligación del inserto y el vector.
- 4) Preparación de células competentes.
- 5) Transformación celular: la transformación
bacteriana consiste en la adquisición de ADN
exógeno, que le confiere un nuevo fenotipo a la
célula huésped
- 6) Identificación de las colonias que
contienen el vector recombinante:
- Para identificar las bacterias transformadas se
utilizan marcadores de selección proporcionados
por los vectores.
- Para identificar las bacterias transformadas se
utilizan marcadores de selección proporcionados
por los vectores.
- 1) Preparación del inserto de ADN que se va a clonar: involucra la
digestión con enzimas de restricción para liberar el fragmento de
interés de la molecula de ADN completa.
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