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Detección de Bacillus cereus

(Metodología convencional)

Preparación de la muestra

Asépticamete, pesar 50g de muestra, en el vaso de la licuadora esteril, agre.gar 450ml de agua de dilucion tamponada con fosfato de Butterfield y mezclar (10,000 a 12,000 rpm). Preparar dilciones de 10 ​​​​2 a 10 6, transfiriendo 10 ml de muestra homogenea a un blanco de dilucion de 90ml (10:1), asi hasta alcanzar la dilucion 10:6.

Inoculación e incubación

En placas de Agar Bacara o MYP (por duplicado para cada dilución) transferir por medio de una pipeta estéril 0,1 ml de cada dilución, esparcir con ayuda de un asa de Drigalsky.

Invertir e incubar las placas por 18 - 24 h a 30ºC (Si no hay colonias claramente visibles, incubar por 24 h adicionales, antes del conteo)

Recuento y seleccion de colonias

En Agar MYP, las colonias de B. cereus , son rosadas y lecitinasa positivas (colonias rodeadas por la zona de precipitados) otras bacterias no están inhibidas y pueden interferir con el aislamiento de B. cereus.

En Agar Bacara las colonias de B. cereus, son color rosa - naranja y son lecitinasas positivas, otras bacterias están inhibidas

Seleccionar las placas que contengan aproximadamente de 15 a 150 colonias productoras de lecitinasa.

confirmar las colonias típicas cultivadas, mediante pruebas bioquímicas.

Confirmación

Perfil bioquímico

Seleccionar 5 colonias tipicas y transferirlas a Agar Nutritivo e inocular los siguientes medios.

Caldo de glucosa rojo de fenol

Caldo de nitrato

Medio VP modificado

Agar tirosina

Caldo de lisozina

Test de hemolisis en Agar sangre de oveja.

Tomar 5 colonias presuntivas y sembrar, incubar a 30 ºC durante 24 h.

Bacullus cereus ​​​​​​, produce una reacción positiva de hemolisis.

Referencias.

BAM Chapter 14: Bacillus cereus. (2019, noviembre 7). Recuperado 14 de mayo de 2020, de https://www.fda.gov/food/laboratory-methods-food/bam-chapter-14-bacillus-cereus

International Standard. ISO 7932: 2004 (E). Microbiology of food an animal feeding stuffs. Horizontal method for the enumeration of presumptive Bacillus cereus. Colony - count technique at 30°C. Third edition, 2004-06-15.