Hemaglutinación pasiva

Método por el cual las particulas o células están recubiertas por antigenos con el fin de determinar la presencia de anticuerpos de una determinada patología

En este tipo de prueba las particulas son transportadoras del antigeno

¿Que tipo de muestra se utiliza?

Células sanguíneas (pollo, ave)

Las células están sensibilizadas con un antígeno

¿Cual es el fin de la practica ?

Determinar la presencia de anticuerpos contra el Treponema Pallidum (sifilis).

Procedimiento para la reacción

1. Preparación de materiales

Incluidos en el kit

Diluyente (diluye tanto controles y muestras)

Control negativo y positivo

No incluidos en el kit

Eritrocitos (no sensibilizados, no tienen superficie el antígeno) sirven verificar el suero del px no tienen anticuerpos

Los eritrocitos sensibilizados (tienen superficie antigeno treponema pallidum) detectar suero px anticuerpos contra el treponema pallidum

Micropipeta

Tips para micropipeta

2. Rotule la placa con el siguiente titulo (control positivo / negativo)

Placa para muestras

¿que tipo de prueba se implementara?

prueba semicuantitativa porque se trabajan diluciones. es decir si una muestra de suero es + entonces a esa muestra se le siguen haciendo diluciones para determinar el titulo ala que es reactiva.

3. Verifique que la micropipeta tenga la capácidad de servir 25 microlitros de diluyente

4. servir el diluyente en todos los pocillos hasta una dilución tentativa, se sirve aproximadamente hasta una dilución 1/32

Recomendación sirva primero el diluyente para así no tener contaminación con la muestra.

tome en cuenta que Las diluciones en esta prueba son seriadas , es decir que de una dilución se realizan las demás diluciones

5. Se comenzara con una dilución 1 / 2

Recomendacio no generar burbujas ala hora de servir para que el reactivo quede al fondo de la placa

6. servir los reactivos control comenzando con el control + y tomando 25 microlitros para depositarlo en los pocillos de la primera fila con la pipeta

7. revolver bien el control y diluyente

A PARTIR DE AQUI YA SE PUEDEN REALIZAR LAS DILUCIONES

8. con la misma pipeta que ha servido el control positivo tomar una licota de 25 microlitros y la coloca en el siguiente pocillo que ya tiene 25 microlitros de diluyente + la licota que vamos a agregar y obtenemos una dilución 1 / 4

9. Tomamos una licota de 25 micro/l y la trasladamos al siguiente pocitllo para obtener una dilución 1/8

10. susecivamente repita el paso 9 para hacer as diluciones tanto de los controles como de las muestras.

AHORA YA REALIZADAS TODAS LAS DILUCIONES APARTIR DE 1/2 HASTA 1/28 PARA HACER UNA DILUCION TENTATIVA Y PODER COMPRBAR HASTA DONDE HACE REACCION EL SUERO DEL PACIETE

11. servir la muestra de eritrocitos no sensibilizados servir en las primeras dos diluciones 1;2 y 1;4 tanto de controles y muestras

12- Tomar 25 microlitros con la pipeta y los colocar la muestra en cada uno de los pocillos

13. Agitamos bien para que los eritrocitos se mezclen bien con el contenido de los pocillos

Recomendacion cuidar de no contaminar tanto nuestro reactivo y pocillos que están cerca

14. servir los eritrocitos sensibilizados (tienen el antígeno). Se servirán desde la dilución 1/8 en adelante

15. Revolver bien con pipeteo en cada una de las diluciones

16. Llevar a la incubadora y esperar 45 minutos , pero igual sera dependiendo la marca del kit que se utilizo ya que en algunos el tiempo puede ser de una hora o una hora y media dependiendo de lo que se quiera determinar

17. Dar lectura a los resultados estos se van a ver en caso de que si son muestras negativas o control negativo un sedimento de eritrocitos como boton que se deposita al fondo del pocito

Si la muestra es positiva o el control positivo se observara como un manto en donde se verán todos los eritrocitos difuminados porque reaccionan los anticuerpos con los antígenos formando la malla y el manto eso es lo que hace que no se precipiten los eritrocitos quedando atrapados formando la malla/ manto.

Fin del procedimiento

HEMAGLUTINACION INDIRECTA -PASIVA