CLAE

Nota:

• Técnica analítica usada para separar e quantificar componentes numa mistura líquida
• É do tipo cromatografia líquida

1. Princípios básicos
   1. Migração Diferencial dos componentes
   2. Diferentes interações entre FM e FE
2. Fase móvel

   Nota:

   • Deve ser líquida ou líquido supercrítico
   1. tipos de eluição
      1. Gradiente

         Nota:

         • há variação na composição e concentração da fase móvel durante a corrida
      2. Isocrático

         Nota:

         • Não há variação na composição e concentração da fase móvel durante a corrida
   2. Precisa ser filtrada e desgaseificado

      Nota:

      • A filtração evita o entupimento e a retirada de ar evita bolhas de ar que podem aumentar a pressão, prejudicando o desempenho e provocando pulsos no sinal do detector
   3. Parâmetro de escolha da FM
      1. Viscosidade

         Nota:

         • Viscosidade acarreta na dificuldade de bombeamento e eleva a Pressão
         • Afeta a difusão dos componentes do analito
      2. PRrssão de vapor
      3. Toxidez
      4. Índice de refração
      5. Corte de UV

         Nota:

         • é o comprimento de onda abaixo do qual o solvente absorve mais que uma unidade de absorbância em uma cela de 1 cm de caminho óptico.
      6. Miscibilidade dos solventes

         Nota:

         • Sistemas não miscíveis afetam o desempenho da bomba, da coluna e induzi ruídos no detector e altera o tempo de retenção e prejudica analises quantitativas
      7. Força dos solventes
3. Fase estacionária
   1. Partículas menores
4. Mecanismos de Separação
   1. Adsorção
      1. Ocorre na interface entre a FM e FE
      2. FM = Apolar e FE = Polar
   2. Partição

      Nota:

      • *Filmes espessos de FE líquida  *Interação forte entre a FE líquida e o analito (grande solubilidade) *Grande superfície líquida exposta à fase móvel
      1. Ocorre no interior do filme da FM
   3. Troca iônica

      Nota:

      • Grupos trocadores de íons presentes n superfície da FE
      1. Me+n + (-Resina)-SO3H = H+ + [(-Resina)-SO3Me]+n-1
      2. An-n + (-Resina)-NH4Cl = Cl- + [(-Resina)-NH4An]-n+1
   4. Exclusão por tamanho

      Nota:

      • Aplicação: Moléculas grandes como proteínas, aminoácidos, etc.
      1. Moléculas retidas

         Nota:

         • Moléculas pequenas são retiras dentro dos poros da FE
      2. Moléculas Carregas

         Nota:

         • Moléculas grandes são carregadas pela FM
   5. Bioafinidade
5. Fase quimicamente ligada
   1. Fase Reversa

      Nota:

      • Compostos com baixa polaridade
      1. FM: Polar e FE: Apolar
   2. Fase normal

      Nota:

      • compostos com elevada polaridade
      1. FM: Apolar e FE: Polar
6. Componentes essenciais da cromatografia líquida moderna
   1. Solvente ou eluente
   2. Bomba de alta pressão

      Nota:

      • Está relacionado ao tempo de retenção, reprodutibilidade e sensibilidade do detector
      • Deve ter a capacidade de impulsionar a fase móvel
      1. Bomba
      2. Controlador de vazão e pressão
   3. Sistema de Injeção

      Nota:

      • Pode ser feito por uma válvula de amostragem ou seringa
      1. Coletor de purga de amostra pela alça
   4. Coluna
      1. Aço inoxidável polido
      2. comprimento de 10 a 30 cm
      3. Tipo
         1. Capilar

            Nota:

            • menor ou igual a 1 mm
         2. Analítica recheada

            Nota:

            • De 2, 3, 4, 5 e 6 mm
         3. Preparativas

            Nota:

            • Maiores que 10 mm
      4. Recheios
         1. Grânulos porosos
         2. Grânulos de camada porosa
         3. Sílica totalmente porosa
      5. Coluna de Guarda

         Nota:

         • Em caso de contaminação a coluna de guarda que é afetada, protegendo o restante da coluna e facilitando a manutenção. 
   5. Detector

      Nota:

      • O detector recebe o sinal, transduz para um sinal elétrico que pode ser registrado ou arquivado eletronicamente.
      • Transdutores: dispositivos capazes de transformar as moléculas que chegam ao seu interior em sinal elétrico. 
      1. Tipos
         1. Índice de refração
         2. Condutividade
         3. Detectores espectrofotométricos
         4. Fluorescência
         5. Eletroquímica
   6. Coletor de solvente
   7. Sistema de registro e tratamento de dados
7. Amostras
   1. Deve ser filtrado