Promotores y terminador transcripcional

Promotores y terminador transcripcional

1. Promotores Inducibles

   • 1. Promotor lacZ. El IPTG es un análogo de Lactosa y se usa para regular la expresión de genes recombinante, (Isopropyl-B-Thiogalactoside ITPG)
   • 2. Promotor de fago T7. Bacterias modificadas para portar el gen de RNA Pol del fago T7 bajo el control del promotor lac.

2. Complementación alfa

   • b-Galactosidasa (gen lacZ), es un homotetrámero. Cada subunidad tiene dominio N terminal (péptido alfa) y C terminal (péptido omega)
     • Homotetrámero
       • Estructuras cuaternarias

3. Terminador transcripcional

   • Partes genéticas al final de un gen u operón que hacen que la transcripción se detenga
     • 1.- Terminadores rho-independientes. secuencias palindromicas con loops integrados por G-C
     • 2.- terminadores rho-dependientes. Rho es una helicasa

4. Genes Reporteros

   • Las proteínas de fusión o proteínas quiméricas formadas a partir de la traducción de dos o más genes previamente independientes.
     • A) Proteínas fluorecentes como reporteros. = Son evidencia directa de transcripción y traducción
       • A través de la sustitución de aminoácidos en proteínas ya conocidas (GFP y RFP) se han mejorado características como el brillo o la estabilidad y modificado su espectro de emisión
     • B) Genes reporteros no fluorecentes
       • Ejemplos: Gen de la luciferasa (Lux), gen Cloranfenicol acetil transferasa (CAT), gen de la β-Galactosidasa (β-Gal) y gen de la β-glucoronidasa (GUS)
     • Etiquetas de afinidad
       • Péptido o proteína que se une a un ligando pequeño (Ej. Iones metálicos), el cual se halla ligado a un soporte sólido. O bien se unen a una proteína inmovilizada (Ej. Anticuerpo)
         • Ejemplos de etiquetas de afinidad
         • Consideraciones sobre el efecto de tags sobre las proteinas de interes :

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