Proceso de la practica

Proceso de la practica

1. A. Preparación de extendidos

   • 1. Esterilizar asa para bacterias, poniéndola verticalmente en la llama del mechero hasta que quede roja en toda su longitud
     • 2. Enfriar asa e introducirla en el borde del medio de cultivo
       • 3. Colocar con el asa 1 gota de agua estéril en una lamina porta-objetos limpia
         • 4. En asa de argolla tomar de suavemente pequeña porción de colonias bacterianas del medio de agar
           • 5. Colocar la muestra encima de la gota de agua del porta objetos, hacer una extensión fina para que las bacterias queden esparcidas correctamente
             • 6. Hacer extendido con todos los cultivos de bacterias entregadas
               • 7. Dejar secar preparación al aire
                 • 8. Fijar preparación y pasarla 2 veces sobre la llama del mechero para que las bacterias así queden adheridas al porta-objetos
             • NOTA: Si se observa que la suspensión no se extiende en el porta-objetos, si no que se recoge en gotas, el porta-objetos entonces esta engrasado y se debería repetir el proceso en uno limpio

2. B. Coloraciones simples

   • 1. Colocar lamina porta-objetos en donde se hizo los extendidos sobre bandeja de coloración
     • 2. Cubrir totalmente los extendidos con colorantes, se debe tener 3 extendidos de cada bacteria y aplicar colorante a los 3
       • Dejar actuar colorantes así:
         • Cristal violeta - 1 minuto
           • Azul de metileno - 5 minutos
             • Safranina - 30 segundos
               • 3. Lavar placas con agua, escurrir y secar a temperatura ambiente
                 • 4. Ya secas las laminas, observar microscopio en 10x, 40x y 100x. Describir forma, distribución y coloración, hacer esquemas de os visto o tomar fotos

3. C. Coloraciones diferenciales (Tinción de Gram)

   • 1. Preparar extendido fino de una colonia bacteriana y secar al aire
     • 2. Fijar material al porta-objetos de manera que no sea arrastrado en el proceso de tinción, pasando el porta-objetos 3 o 4 veces en la llama del mechero
       • 3. Colocar preparado sobre soporte de tinción y cubrir superficie con solución de cristal-violeta por 1 minuto
         • 4. Lavar bien con agua destilada estéril
           • 5. Cubrir preparado con solución de yodo (Lugol de Gram) por 1 minuto
             • 6. Lavar de nuevo con agua destilada estéril
               • 7.. Sujetar porta-objetos entre el pulgar e indice, bañar superficie con gotas de colorante (Alcohol-acetona) por 10 segundos
                 • 8. Lavar de nuevo con agua corriente y colocar porta-objetos otra vez sobre el soporte, cubrir la superficie con safranina por 1 minuto; lavar con agua corriente
                   • 9. Examinar preparado al microscopio, las bacterias Gram-positivas se miran color violeta, las Gram-negativas rojo o rosado