Cromatografia

Cromatografia

1. Conceitos básicos

   • Método físico-químico de SEPARAÇÃO
     • Distribuição dos componentes em duas fases que estão em contato íntimo
       • Fase móvel
         • Está em movimento
       • Fase estacionária
         • Está parada/estacionada
   • História
     • Botânico russo - Tswett (1906)
       • Separação dos componentes de extratos de folhas
         • Pigmentos coloridos
           • Chroma (cor)
             • Embora a separação dos pigmentos não dependa da cor. A separação ocorre por polaridade das moléculas presentes.
           • Graphe (escrever)

2. Classificação

   • FORMA FÍSICA
     • Planar
       • Fase estacionária disposta em uma superfície plana
         • Cromatografia em papel
         • Cromatografia em camada delgada (CCD)
     • em Coluna
       • Fase estacionária inserida dentro de uma coluna cilíndrica
         • Separação
           • Gravidade
           • Alta pressão
             • CLAE (HPLC)
   • FASE MÓVEL
     • Líquida
       • Dá origem à CLAE
       • Pode ser polar ou apolar
         • Polar apresenta maior afinidade pela água
         • Apolar apresenta menor afinidade pela água
     • Gasosa
       • Amostra deve ser volátil ou termoestável
       • Separação ocorre por volatilidade e interação com a fase estacionária dentro da coluna
   • FASE ESTACIONÁRIA
     • Sólida
       • Sílica ou alumina
         • Interações de forças intermoleculares
           • Compostos mais polares ADSORVEM (grudam)
             • Adsorção
     • Líquida
       • LÍQUIDO imobilizado em um suporte sólido
         • Distribuição entre as fases por solubilidade
           • Partição clássica
             • FM Apolar
             • FE Polar
     • Quimicamente ligada
       • Grupos funcionais estão quimicamente ligados a um suporte sólido
         • Hidrocarbonetos
           • C18
           • C8
           • Partição Fase reversa
             • FM Polar
             • FE Apolar
         • *Alguns autores consideram como outro tipo de FE líquida (Pseudolíquida)
           • Também se baseia em SOLUBILIDADE
   • MECANISMOS DE SEPARAÇÃO
     • FÍSICOS
       • ADSORÇÃO
         • FE é um sólido POLAR, como a sílica
       • PARTIÇÃO
         • FE é um líquido
           • NORMAL
             • FM APOLAR
             • FE POLAR
           • FASE REVERSA
             • FM POLAR
             • FE APOLAR
               • C8/C18 quimicamente ligada a um suporte sólido (pseudolíquido)
     • QUÍMICOS
       • TROCA IÔNICA
         • FE com CARGA ELÉTRICA
           • Retém partículas com carga oposta
             • HEMOGLOBINA GLICADA
               • Apresenta menos cargas positivas que a não glicada, logo, fica retida por mais tempo na coluna do que a glicada
                 • Mensura especificamente a HbA1c.
                   • PADRÃO-OURO
       • AFINIDADE
         • BIOAFINIDADE
           • Separação baseada na interação específica entre biomoléculas
             • Ligante imobilizado na FE
               • Principalmente Ag/Ac
         • Ácido bórico
           • HEMOGLOBINA GLICADA
             • INTERAÇÃO COM A FASE ESTACIONÁRIA PELO AÇÚCAR
               • Não separa especificamente a HbA1c
                 • Pode superestimar os resultados
               • Não há separação de variantes da Hb
     • MECÂNICO
       • EXCLUSÃO
         • FE com POROS
           • Separação por tamanho