Electroforesis

Electroforesis

1. Migración de moléculas a través de un gel u otra tipo de matriz de naturaleza porosaen el cual, por acción de un campo eléctrico, estas partículas migran hacia el cátodo o ánodo (electrodos - y +), serán separadas de acuerdo a su tamaño o peso molecular

   • La electroforesis en gel es una técnica muy utilizada para separar moléculas o fragmentos de moléculas de ácidos nucleicos
     • Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma. Así, moléculas de DNA de diferente tamaño, van a emigrar de forma distinta en un gel de electroforesis. La distancia recorrida por cada fragmento de DNA va a ser inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular.
       • Poliacrilamida
         • Electroforesis vertical el cual es un sistema continuo no denaturante
           • Separación de moléculas por peso molecular
             • Puede realizarse en el rango de pH de 2 a 11
               • El desplazamiento de las cadenas polipeptídicas es proporcional al logaritmo de la masa, esto nos permite estimar el peso molecular de una proteína comparándola con la distancia de migración de un patrón de proteínas de peso molecular conocido (Markers)
                 • Las manchas se revelan mediante un colorante generalmente Azul de bromoferol
           • Continúa
             • Las condiciones y/o tipo de gel no cambian.
           • Discontinua
             • Está conformado por dos geles de poliacrilamida de resolución y empacamiento que presentan diferente concentración, composición y pH. Ambos geles se encuentran unidos pero limitados por una fase de separación visible al trasluz
               • El gel de empacamiento generalmente se localiza en la parte superior del sistema formando los pocillos donde se depositarán las muestras
               • El gel de resolución por su parte forma el cuerpo del gel por donde migrarán y se separarán las proteínas.
       • Agarosa
         • Electroforesis horizontal
           • Separa fragmentos de ADN que van de 200 a 50.000 pares de bases
             • Un pozo se reserva para el marcador de peso molecular
               • A los otros se transfieren las muestras a analizar.
                 • Se le añade bromuro de etidio, sustancia que se intercala entre las bases del DNA y es fluorescente cuando se ilumina con luz ultravioleta. Tras la electroforesis, se visualiza el gel con una lámpara de luz UV, y se verán las bandas correspondientes a las muestras de DNA aplicado y los marcadores de peso molecular.

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