Fichas
Vorlesung 2 - Methoden
Fichas del conjunto (7)
- 1Typischer Projektablauf in der modernen Zellbiologie
- 2Zellen reinigen: FACS: Fluorescence activated cell sorter/scanner (Durchflusscytometrie)- Verfahren zur quantitativen Bestimmung von Oberflächenmolekülen und intrazellulären Proteinen, Peptiden und DNA.
- Prinzip ist eine Antigen-Antikörper-Reaktion, die mit Fluoreszenzfarbstoff-markierten spezifischen Antikörpern durchgeführt wird.
- Zur Quantifizierung von DNA werden interkalierende Farbstoffe (ohne Antikörper) eingesetzt. - 3Zellen reinigen: Laser-Mikrodissektion
- 4Organellen reinigen: Zellfraktionierung
- 5Herstellung des Homogenats durch Homogenisierung-Bei der Homogenisierung wird Zellgewebe in einer Pufferlösung zerkleinert
-Es entsteht ein dünnflüssiger Brei (Zellhomogenat) besteht aus unzerstörten Zellen und Zellbestandteilen
-Bei sorgfältiger Arbeit bleiben die Zellorganelle intakt und weitgehend funktionsfähig. - 6Organellen reinigen: Dichtegradientenzentrifugartion- Bei der Dichtegradientenzentrifugation wird das Homogenat auf die Oberfläche eines Dichtegradienten aufgetragen und anschließend zentrifugiert. Nun haben sich die Zellbestandteile zu ihrer jeweiligen Dichtezone gesellt.
- Sinnvoll ist dieses Verfahren, wenn man Zellbestandteile ähnlicher Größe mit einem geringen Dichteunterschied isolieren will. - 7Mutanten herstellen
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- Zellbiologie Fichas sobre Vorlesung 2 - Methoden, creado por Mai H el 03/08/2016.
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