Técnicas Secundarias

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Glosario de la Ud. 3; Técnicas basadas en reacciones antígeno-anticuerpo secundarias
Cruz López García
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Técnicas de Aglutinación Técnicas que se basan en la capacidad que tienen los antígenos multivalentes para unirse a sus anticuerpos complementarios dando lugar a inmunocomplejos o agregados visibles a primera vista.
Antígenos Multivalentes Antígenos que tienen varios epitopos o puntos de unión al anticuerpo.
Fenómeno de Zona Ausencia de aglutinación por exceso de antígeno o de anticuerpo, por lo que el resultado es un falso negativo.
T Técnicas en las que el antígeno se halla sobre la superficie de partículas naturales como diversos microorganismos y eritrocitos. Estas técnicas se utilizan para detectar anticuerpos en suero contra antígenos de las membranas de estas células y pueden realizarse en tubo o en placa. Estos antígenos son insolubles. Las más habituales son la prueba rápida de aglutinación en placa y la hemaglutinación directa.
Placa de Microtitulación Placa con múltiples pocillos que se utilizan como pequeños tubos de ensayo.
Prueba Rápida de Aglutinación en Placa Técnica de aglutinación directa en la que se usa una suspensión de bacterias del género Brucella teñidas con rosa de Bengala como antígeno. Se usa para el diagnóstico de brucelosis. Se usa solo como prueba de descarte porque a menudo se obtienen resultados falsamente positivos.
Hemaglutinación Directa Técnica de aglutinación directa que se utiliza para determinar los grupos sanguíneos ABO y Rh.
Técnicas de Aglutinación Indirecta Técnicas en las que el antígeno ha sido transferido a un soporte (partícula o célula). Se realizan normalmente en placa. Los antígenos son solubles y hay que insolubilizarlos mediante la fijación a un soporte inerte (bolas de látex, partículas de bentonita, carbón activo o gelatina) o a una célula (eritrocitos). Las técnicas más habituales son la aglutinación en látex en placa, la hemaglutinacion indirecta y una variante de esta, la inhibición de la hemaglutinación.
Sensibilización En la técnica de aglutinación de látex en placa, proceso por el que las partículas de látex son recubiertas por antígenos o anticuerpos solubles mediante interacciones hidrofóbicas entre sitios de la proteína y la superficie de poliestireno de las partículas. Así quedan “sensibilizadas” y se pueden usar para la detección de antígenos o de anticuerpos.
Hemaglutinación Indirecta (HAI) Técnica de aglutinación indirecta que utiliza como soporte antígenos de hematíes convenientemente tratados. No son antígenos de los propios hematíes, se usan hematíes como soporte para incorporar antígenos de distinta procedencia frente a los que se buscan anticuerpos específicos. Así, los hematíes también son “sensibilizados”.
Hemaglutininas Glucoproteínas antigénicas de algunos patógenos como el virus de la gripe o la rubeola que son capaces de unirse a receptores de membrana de hematíes de mamíferos y aves y provocar su aglutinación. Esta característica se utiliza en la técnica de inhibición de la hemaglutinación.
Inhibición de la Hemaglutinación (IHA) Técnica que se basa en la presencia de hemaglutininas para detectar si en un suero problema hay anticuerpos específicos frente a esos patógenos que las producen. Si hay aglutinación quiere decir que no hay anticuerpos en el suero problema y por tanto el resultado será negativo. Si no hay aglutinación, quiere decir que tiene Ac que impiden esta reacción y por tanto el resultado será positivo.
Reactivo de Coombs Antisuero animal que contiene anticuerpos (suelen ser IgG, IgM y C3 de cabra) que actúan como antígenos frente a los que reaccionarán las Ig humanas del suero problema (si este contiene estas Ig específicas). La incubación de este reactivo con eritrocitos lavados del paciente provocará su aglutinación.
Lavado de Eritrocitos Técnica que trata de eliminar la mayor cantidad posible de plasma con suero fisiológico. Se añade suero fisiológico a la suspensión de hematíes, se centrifuga, se descarta el sobrenadante y se vuelve a repetir el proceso hasta que el sobrenadante salga transparente y limpio. Con este lavado se eliminan la mayoría de proteínas del plasma y casi todos los glóbulos blancos.
Autoanticuerpos Son un tipo de anticuerpos dirigidos erróneamente contra órganos o tejidos del organismo. El sistema inmunitario de un individuo puede producir uno o varios tipos de autoanticuerpos cuando su organismo fracasa en la distinción entre proteínas propias y proteínas ajenas (no propias).
Técnicas de Precipitación Técnicas que se basan en la reacción de la precipitación que ocurre cuando un antígeno soluble multivalente se une con su anticuerpo específico (bivalente en el caso de las IgG o decavalente en el caso de las IgM), dando lugar a inmunocomplejos que precipitan en el medio de la reacción.
Técnicas de Precipitación en Medio Líquido Se basan en medir la turbidez que produce la precipitación de inmunocomplejos en un medio líquido.
Inmunoturbidimetría Técnica que compara la intensidad de un rayo de luz emergente (luz transmitida) con la del rayo incidente. Existe una relación entre la concentración de analito (en este caso el inmunocomplejo) y la transmitancia medida en un espectrofotómetro, que nos permite medir la concentración de dicho analito. Está indicada cuando la concentración de partículas suspendidas es alta.
Inmunonefelometría Técnica que se basa en comparar la intensidad de un rayo de luz dispersada con la del rayo incidente. Se utiliza cuando la muestra contiene pequeñas concentraciones de partículas suspendidas, puesto que es más sensible que la inmunoturbidimetría.
Técnicas de Precipitación en Gel Técnicas en las que se utiliza un soporte semisólido (gel) en el que tendrá lugar la migración de Ag y Ac para formar bandas de precipitación. Las de difusión espontánea son la doble difusión, la inmunodifusión radial, la inmunoelectroforesis y la inmunofijación. Las de difusión forzada en campo eléctrico son la contrainmunoelectroforesis y la electroinmunodifusión.
Doble Difusión o Técnica de Ouchternoly Técnica de precipitación en gel de difusión espontánea que permite el análisis cualitativo y semicuantitativo de Ag o Ac.
Inmunodifusión Radial o Técnica de Mancini Técnica de precipitación en gel de difusión espontánea que permite cuantificar fracciones plasmática de proteínas como Ig, factores de coagulación o componentes del complemento. Se basa en la medición de anillos de precipitación.
Inmunoelectroforesis Técnica de precipitación en gel de difusión espontánea que combina la electroforesis con la inmunodifusión. Es una técnica cualitativa.
Inmunofijación Técnica de precipitación en gel de difusión espontánea cuyo objetivo es la detección de paraproteínas.
Paraproteínas Igs anómalas que, o bien solo tienen cadenas ligeras o solo pesadas (o una de cada) y que son producidas en exceso por células plasmáticas malignas.
Gammapatía Monoclonal Conjunto de patologías que cursan con el incremento de una Ig concreta, que además, es anormal (paraproteína).
Contrainmunoelectroforesis Técnica que consiste en una doble difusión forzada mediante la aplicación de un campo eléctrico.
Electroinmunodifusión o Electroforesis en cohete Inmunodifusión radial forzada por aplicación de una corriente eléctrica.
T Técnica que se basa en que la formación de inmunocomplejos activa el sistema complemento y produce complejos que lesionan las membranas de los eritrocitos y otras células (utilizan los hematíes como sistema revelador-se observa la lisis de los hematíes). Proporcionan una medida indirecta de anticuerpos que no dan reacciones visibles. También se utiliza para identificar y cuantificar antígenos.
C3b Proteína del sistema del complemento común a las tres vías que produce la muerte del patógeno por atracción de células inflamatorias, opsonización y perforación de la membrana celular del patógeno.
Hemolisinas Sustancias que producen la lisis de los eritrocitos y la liberación de hemoglobina. Pueden ser Ac, sustancias vegetales, ciertos venenos o sustancias liberadas por determinadas bacterias. En el caso de las hemolisinas que son Ac, estas se utilizan en la técnica de fijación de complemento como sistema revelador.
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