Tecnicas de Biologia Molecular Aplicadas a Biotecnologia Alimentaria

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ESTEFANIA GOMEZ NIETO
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Tecnicas de Biologia Molecular Aplicadas a Biotecnologia Alimentaria
  1. Estas tecnicas fueron aplicadas en el analisis de jugo de mora en las siguientes muestras
    1. Jugo de mora con stevia
      1. Jugo de mora con stevia pasteurizado
        1. Jugo de mora con stevia sin pasteurizar
        2. Jugo de mora con sacarosa
          1. Jugo de mora con sacarosa pasteurizado
            1. Jugo de mora con sacarosa sin pasteurizar
          2. Tecnicas de biologia moleculas aplicadas en las muestras
            1. Microfiltracion Tangencial
              1. Estuvo conformado por una bomba centrífuga, para el suministro del flujo tangencial; una bomba de desplazamiento positivo, que condujo la alimentación y un intercambiador de calor tubular, para el control de la temperatura. Se mantuvo la temperatura del jugo a 35°C, para evitar la disminución de la aceptación sensorial del jugo en estudio. La membrana empleada durante la etapa de microfiltración posee un tamaño de poro igual a 10nm, de 5kDa, área de filtración de 0,33m2. Los ensayos de microfiltración, se iniciaron en condiciones de presión, a través de la membrana igual a 2,54bar y un flujo de permeado de 270L/hm2. Dichos ensayos, se efectuaron a una temperatura constante, con una presión transmembranaria constante, una velocidad tangencial constante y un tiempo aproximado de 70 min.
              2. análisis metabolómico
                1. Se extrajo, dos veces por semana, una porción de cada muestra almacenada; el procedimiento, se realizó en el interior de una campana de flujo laminar. Las muestras fueron preservadas en tubos eppendorf de 1,5mL y conservadas a -70°C. El día para el análisis, todas las muestras fueron descongeladas, centrifugadas (14000rpm por 10 minutos), diluidas con agua grado HPLC en proporción 1:1 y trasvasadas a los viales para introducirlas al UPLC.
                2. Sistema CL-MS empleado
                  1. Los análisis fueron realizados en un sistema de Cromatografia Líquida de Ultra Alta Resolución, temperatura seca 270° C, El espectrómetro de masas fue equilibrado previamente, con las soluciones estándares correspondientes. Los experimentos de fragmentación inducida por colisión MS2, se realizaron utilizando la interfaz ESI operativa, en el modo de ion positivo, usando una velocidad de barrido de exploración de 1/s y una rampa de energía de colisión de 10 a 40 eV. La temperatura de desolvatación fue 330°C y el flujo de gas de desolvatación de 350 L/h. Todas las muestras fueron inyectadas por triplicado, en dos réplicas de forma aleatoria.
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